在往期小诺有分享了一些细胞培养相关的文章,今天,我们来看看细胞检测方面会用到的技术——MTT和MTS。
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MTT法原理为活的哺乳动物细胞线粒体脱氢酶(mitochondrialde
omgenase)能够裂解MTT(四甲基偶氮哇盐3-(4,5-dimethylazol-2-yl)-2,5-dipheny-
tetrazoliumbromide)的四氮哇环,使黄色的MTT还原变为紫色的衍生物(MTT-formazan),该物质溶解后在560-610nm中有一个较宽的最大吸收峰,通过酶标仪测定MTT-formazan吸光度(A),该值的大小与活细胞数之间有良好的线性关系。
但由于常规的MTT法最终产生的MTT-formazan不溶于培养基,故在检测之前必须除去大量的培养基上清,然后加入有机溶剂酸化异丙醇或DMSO等溶解MTT-formazan颗粒,这样给操作带来的不便,使实验的重复性较差。因此,是否能形成一种水溶性的甲瞪产物是使该法更为有效的关键。
为此,Oween等设计出了一种新型的MTT类似物一MTS,MTS法原理同MTT法,但优于MTT法。MTS在PMs(Phenazinemethosulfate)的存在下可被活细胞还原形成水溶性的甲增产物(故MTS需与PMS合用),因而被用来建立了可检测细胞活力和增殖能力的MTS检测法。 MTS形成的水溶性甲腊产物在490~500nm处有最佳吸收,我们一般选择492nm。每孔检测的细胞数量在3000~5000为宜,作用一小时后即可检测,以3小时的检测结果为最佳。
▶ 与MTT法相比,MTS有以下优点
▶ 1 操作简便
▶ 技术原理 ◀
MTT法原理为活的哺乳动物细胞线粒体脱氢酶(mitochondrialde
omgenase)能够裂解MTT(四甲基偶氮哇盐3-(4,5-dimethylazol-2-yl)-2,5-dipheny-
tetrazoliumbromide)的四氮哇环,使黄色的MTT还原变为紫色的衍生物(MTT-formazan),该物质溶解后在560-610nm中有一个较宽的最大吸收峰,通过酶标仪测定MTT-formazan吸光度(A),该值的大小与活细胞数之间有良好的线性关系。但由于常规的MTT法最终产生的MTT-formazan不溶于培养基,故在检测之前必须除去大量的培养基上清,然后加入有机溶剂酸化异丙醇或DMSO等溶解MTT-formazan颗粒,这样给操作带来的不便,使实验的重复性较差。因此,是否能形成一种水溶性的甲瞪产物是使该法更为有效的关键。
为此,Oween等设计出了一种新型的MTT类似物一MTS,MTS法原理同MTT法,但优于MTT法。MTS在PMs(Phenazinemethosulfate)的存在下可被活细胞还原形成水溶性的甲增产物(故MTS需与PMS合用),因而被用来建立了可检测细胞活力和增殖能力的MTS检测法。 MTS形成的水溶性甲腊产物在490~500nm处有最佳吸收,我们一般选择492nm。每孔检测的细胞数量在3000~5000为宜,作用一小时后即可检测,以3小时的检测结果为最佳。
