新浪博客

EdU产品使用说明1

2011-06-28 12:12阅读:
产品简介
试剂盒应用EdU直接测定细胞内DNA的变化。EdU5-Ethynyl -2’- deoxyuridine)是一种胸腺嘧啶核苷类似物,能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在复制的DNA分子中,通过基于EdUApollo荧光染料的特异性反应快速检测细胞DNA复制活性,适用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA修复、病毒复制、细胞标记示踪等方面的研究,尤其适合进行siRNAmiRNA、小分子化合物及其他药物的筛选实验。
BrdU检测方法相比,EdU检测方法更快速、更灵敏、更准确。EdUT非常相似,而EdU染料只有BrdU抗体的1/500,在细胞内很容易扩散,无需DNA变性(酸解、热解、酶解等),可有效避免样品损伤,而且无需抗原抗体反应,能在细胞和组织水平更准确地反映DNA复制活性。

试剂盒内容
试剂
浓度
In vitro
In vivo
C10310
C10327
C10313
C10321
C10322
C10314
EdU溶液 (试剂A)
1000X
20 μL
100 μL
200 μL
-
-
-
EdU溶剂 (试剂A)
粉末
-
-
-
2 mg
10 mg
50 mg
Apollo®反应缓冲液 (试剂B)
20X
500 μL
2.5 mL
5 mL
500 μL
500 μL
500 μL
Apollo®催化剂溶液 (试剂C)
100X
100 μL
500 μL
1 mL
100 μL
100 μL
100 μL
Apollo®荧光染料溶液 (试剂D)
300X
30 μL
150 μL
300 μL
30 μL
30 μL
30 μL
Apollo®缓冲添加剂 (试剂E)
粉末
100 mg
500 mg
1 g
100 mg
100 mg
100 mg
Hoechst 33342 (试剂F)
100X
150 μL
750 μL
1.5 mL
150 μL
150 μL
150 μL






运输与保存
室温运输,4˚C储存,勿冻存,荧光试剂请避光保存,可稳定储存一年。
使用前须知
贴壁细胞宜采用荧光检测方式,适用于荧光显微镜、共聚焦显微镜、高内涵筛选仪检测,亦可进行爬片检测,。
悬浮细胞可用涂片方式荧光检测,亦可采用流式细胞仪分析,但流式细胞仪需要具备相应荧光通道(4)
实验准备
• PBS (pH 7.2~7.6)
渗透剂(0.5% Triton X-100PBS)
甘氨酸溶液(2 mg/mL)(去离子水配置)
细胞固定液(即含4% 多聚甲醛的PBS)

• 96/24/12/6孔培养板
注意:请使用一次性手套,废液请妥善处理。
实验参考
1 EdU培养基及染色反应液的使用量参考

96孔板*
48孔板
24孔板
12孔板
6孔板
5 cm 小皿
EdU培养基
100 μl
150 μl
200 μl
300 μl
500 μl
2 mL
染色反应液
100 μl
150 μl
200 μl
300 μl
500 μl
2 mL


注:1*表示贴壁细胞通常采用的培养容器,EdU培养基与染色反应液用量以覆盖细胞为宜;2)悬浮细胞EdU用量请按培养体积而定。

表2 EdU孵育时间取决于细胞生长速度



3T3
Hela
HEK293*

细胞系
人胚胎细胞
酵母细胞
人成纤维细胞
人宫颈癌细胞
人胚肾细胞系
人神经细胞
细胞周期
~30min
~3h
~18h
~21h
25h
~5d
孵育时间
5min
20min
2h
2h
2h
1d




注: 1EdU孵育时间取决于细胞周期,一般为细胞周期的1/101/5
2*考虑到细胞培养基、温度、湿度、光线等其他因素的影响,细胞周期会有所变化,但大多数细胞系可采用2h孵育时间。

表3 Apollo®染色反应液的配置(现用现配)
配制顺序
Apollo®染色反应液
500μL*

我的更多文章

下载客户端阅读体验更佳

APP专享