穿心莲内酯的最佳提取工艺研究

2011-09-16 16:20阅读：

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穿心莲内酯的最佳提取工艺研究摘　要:目的：确定自穿心莲提取穿心莲内酯的最佳工艺。方法：以穿心莲内酯含量为指标，比较冷浸提取、超声提取、回流提取三种方法提取物中穿心莲内酯含量，并以正交实验确定冷浸提取的最佳工艺。结果：三种提取方法中冷浸提取的提取物中穿心莲内酯含量最高，且颜色雪白，有利于进一步分离精制，正交实验确定最佳提取方案为10倍量95％乙醇冷浸2次。结论：冷浸提取方法简单易行，适于大量生产。关键词:穿心莲穿心莲内酯冷浸提取穿心莲(Androsmphis paniculata(Burm．f．)Nees)为常用中药，味苦性冷，具有清热解毒、凉血消肿等功效。临床上多用于呼吸道感染、急性菌痢等疾病的治疗。穿心莲主要含二萜类内酯：穿心莲内酯(Andrographolide)、新穿心莲内酯 (Neoandrographolide)、往氧穿心莲内酯等，其中穿心莲内酯含量最高。传统的穿心莲内酯提取溶媒有水(包括酸水、碱水)、乙醇，提取工艺有热回流、冷浸、超声提取等，文献所得结论也不尽相同。张玲等[卜 ]以穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯为检测指标，以醇提工艺提取内酯成分含量较高，其中醇浸渍工艺>醇渗漉工艺>醇温浸工艺>醇回流工艺，而各工艺出膏率正好

与之相反。郭彬等L3 J的结论用万分之一碱水(碱提酸沉法)从穿心莲茎叶中提取穿心莲浸膏较为适宜。吴俊伟等【4j设计酸水法提取穿心莲总内酯，可达乙醇冷浸法的75％以上。与乙醇回流法相当，远远超过碱水提和冷水浸。 1 实验材料 1．1 药品穿心莲药材购于天津市南开区平湖药店；穿心莲内酯标准品中国药品生物制品检定所 0797—100106)。 1．2 实验设备 LabAlliance高效液相色谱仪；LabAlliance Model 5000紫外一可见光检测器；Anastar色谱工作站。 2 方法与结果 2．1 不同提取方法提取物穿心莲内酯含量比较。 A冷浸提取法：称取穿心莲粗粉50．0g，以10倍量 (500m1)95％的乙醇常温冷浸3次，每次1天，合并3次提取液，备用。 B超声提取法：称取穿心莲粗粉50．0g，以10倍量 (500m1)95％的乙醇超声提取3次，每次3小时，合并3次提取液，备用。 c回流提取法：称取穿心莲粗粉50．0g，以10倍量 (500m1)95％的乙醇回流3次，每次2小时，合并3次提取液，备用。以上提取液分别减压回收乙醇至约原溶剂的1／3，加8g 活性炭回流30min脱色，趁热过滤，减压回收乙醇至出现混浊(约50m1)，加适量蒸馏水静置，将沉淀过滤，自然干燥，得样品A、B、C，备用。以上样品按2．3．3项及色谱条件测定穿心莲内酯含量，结果见表I。表I．不同提取方法提取物穿心莲内酯含量冷浸提取法得到的提取物穿心莲内酯含量最高，且颜色雪白，适宜进一步精制。 2．2 最佳提取工艺的选择称取穿心莲粗粉30．0g，按冷浸法进行3因素3水平正交实验，A提取次数(2次、3次、4 次)；B溶剂倍数(10倍、8倍、6倍)；c乙醇浓度(75％、85％、 95％)。分别将9组实验所得溶液合并浓缩，各加6g活性炭回流脱色，浓缩后放置，沉淀过滤，自然干燥，分别记为样品1 ～ 9，备用。以上样品按照供试品溶液的制备项及色谱条件测定穿心莲内酯含量，结果见表2。表2．穿心莲提取正交实验结果根据正交实验直观分析，穿心莲内酯的最佳的提取工艺为A】c3B1，即10倍量95％乙醇冷浸2次，而方差分析得到的结论是只有因素A提取次数对实验结果有明显影响。 2．3 高效液相色谱法进行穿心莲内酯含量测定。．3．1 色谱条件 Phenomenex c一18色谱柱(5 ，250× 4．6mm)；活动相：甲醇：水(52：48)，流速：lml·min～；检测波长：225nm：柱温：25℃；进样环体积201~1。 2．3．2 对照品溶液的制备精密称取穿心莲内酯对照品 1．1mg，用甲醇溶解于25mi的容量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，制成浓度为o．044ms／ml的对照品溶液。 2．3．3 供试品溶液的制备精密称取2．I．2项样品A、B、 c、I、2、3、4、5、6、7、8、9各Img，用甲醇溶解于25IIll的容量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取3ml于lOml的容量瓶，用甲醇稀释至刻度，摇匀，备用。 2．3．4 方法学考察 2．3．4．1 线性关系的考察精密吸取上述对照品溶液0．5、 1．0、2．0、3．0、4．0、5．0、6．Om1分别置lOml容量瓶中，用甲醇稀至刻度，摇匀，浓度范围为2．2—26．4~,／ml，过0．45p,m滤膜，按2，3．1项色谱条件，依次进样20 ，测定蜂面积。以穿心莲内酯浓度为纵坐标，峰面积为横坐标，绘制标准曲线，得回回方程：Y=2．4831×10 X+1．666，相关系数r=0．9998，穿心莲内酯在4．4—22．0 IIll范围内呈良好的线性关系。标准曲线见图1。图1．穿心莲内酯的标准曲线表3．不同浓度对照品溶液峰面积 2．3．4．2 精密度试验精密吸取同一对照品溶液(浓度为 13．2 g／rn1)进样20 ，重复进样测定5次，穿心莲内酯峰面积均匀积分值为470555(n=5)，RSD为2．2％(见表4)。表4 2．3．4．3 重现性试验精密称取同一制备样品约lmg，用甲醇溶解于10ml的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，标匀，精密吸取lml于10ml的容量瓶，用甲醇稀释至刻度，摇匀，进样 20ul，重复上述操纵5次进样，经含量测定，穿心莲内酯含量均匀值为75．33％(n=5)，RSD为2．3％(见表5)。表5 2．3．4．4 加样回收试验精密称取制各样品约L,ng，用甲醇溶解于25rnl的容量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取 3ml于10ml的容量瓶，用甲醇稀释至刻度，摇匀，进样20 。精密称取穿心莲内酯对照品1．2mg，用甲醇溶解于25rnl 的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0．04Stag／ rnl的对照品溶液，精密吸取lml于10ml的容量瓶，同时，精密吸取供试品溶液3ml于该10ml的容量瓶，相当了加进对照品0．048rag，各进样3次。加样回收率为99．71％，RSD= 3．48％(见表6)。表6． 3 结论经过对三种提取方法的比较，冷浸法得到的提取物颜色雪白，穿心莲内酯含量高，所以选择冷浸法提取。穿心莲内酯的最佳的提取工艺为10倍量95％乙醇冷浸2次。且该工艺简便易行，适于产业生产。有关穿心莲内酯的最佳精制式工艺另文发表。 HPLC测定莲芝消炎胶囊中穿心莲内酯的含量

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