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PMT有两种基本模式

2014-05-24 14:55阅读:
在发光仪上,PMT为传统的选择。它们的优势包括良好的灵敏度,宽广的动态范围和较宽的光谱相应。因为PMT具有很低的暗电流,使得它们具有极佳的信噪比。
PMT有两种基本模式——单光子计数和电流感应。有些复合系统是在每秒百万个光子以下为单光子模式,超过之后为电流感应。
PMT单光子计数系统是超灵敏的。用这类检测器主要是为了满足灵敏度要求较高的测试和定量。越高要求的灵敏度,价格越高。样品测试室必须是光密闭性非常好的。如果光太强会损害PMT。
PMT电流感应系统也能获得较好的灵敏度,经常用于比单光子计数系统检测的更强的光。
对于选择何种模式的PMT检测器,需要与你的实际需要结合起来选择。现在,这两种检测器的化学发光仪操作都比较简单,灵敏度也都比较好。对此有一个正确的理解,你就可以选择一个比较适合你的应用的设备。
PMT主要应用在液相中化学发光的检测,仪器形式可以为管式和板式。其检测结果单位值为RLU(Relative Light Unit),各个公司生产的产品其对RLU的定义会有所不同。
固态检测
光电二极管能够感应比光电倍增管所感应的更强的光强度。对于那些需要测试高强度光的应用,选择这样的检测器比较好。然而,固态检测器的暗电流比光电倍增管一般要高很多。解决这个问题的方法之一是通过Peltier或者是其它的热电制冷设备冷却固态检测器。在0~30摄氏度范围内,固态检测器的暗电流随温度的降低会急剧下降。冷却的检测器能够整合1到100秒范围内所检测到光信号而不会被暗电流所覆盖。
管和微孔板
玻璃、透明或半透明的塑料管、比色皿是化学发光测试比较理想的材料。理想的是光能够通过一个平面然后测试,以减少边际效应。曲面也可以使用,如圆柱型的测试管。用不同的测试管测试比较结果,这些管必须是统一生产的,才可以比较结果。
Western Blot Digital PCR


微孔板——从化学发光反应中发射出的光是各向同性的,即在各个方向上同等发射出来的。如果一个化学反应是在透明的微孔板中的微孔中进行,光不仅从垂直方向发散,还从水平方向发散出来。光很容易的通过各个孔之间的间隙和孔壁。光较强的孔就会干扰相邻的孔。因此,化学发光测试一般不用透明微孔板。
不透明的微孔板和板条主要有两种——白色和黑色。使用者需要注意的是黑色的因为有光吸收,所以它的信号会比白色板有很明显的减弱(将近10倍)。因为所有的孔是同等比例的收到影响,所以不管他们的强度,定量并没有问题。白色或黑色板的选择,主要是基于预期检测信号的强弱,白色板用于检测较弱光的检测,黑色板用于检测强光的检测。黑色板的另一优点就是可以削弱非特异性结合所带来的问题。
此外,白色板并不是完全同等不透明。为荧光设计的白板的白色素比用于化学发光的白板的要少的多。在荧光检测时,每检测一次,一般在针对一个孔,消除了相邻孔之间的干扰。白色微孔板的好坏很容易检测,只要在板的后面放上一只灯,然后看每个孔。如果穿过的灯光不仅仅是淡淡的,那么用于较强的化学发光底物的分析是会有一些问题的。

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