细胞周期同步化
1.自然同步化
自然同步化在自然界中,细胞自然同步化的现象在动、植物及粘菌中都有所发现,它们不受人为条件的干扰,因而有可能在接近自然的条件下进行观察。
缺点:自然同步化受到很多条件的限制。
2.人工选择同步化
人工选择同步化:人为的将处于不同细胞周期的细胞分离开,从而获得不同时期细胞群体的方法。
人工选择同步化的方法:
(1)有丝分裂选择法
有丝分裂选择法(反复振摇法)
利用有丝分裂细胞变圆隆起,与培养皿的附着性降低的特点。此法的特点是细胞不受药物等的伤害,同步化程度高,放入37℃环境中,收集的细胞即可同步分裂。缺点是分裂细胞一般占1%-2 %,分离的细胞数量少。
(2)密度梯度离心法
根据周期时相不同而细胞大小不同。
此法的优点是:简单、成本低。
缺点是:同步程度有限,因同一时相的细胞大小并非都一致,而且对大多数种类的细胞不适用。
3.人工诱导同步化
2.1 S期DNA 合成阻断法
S期DNA 合成阻断法:选用DNA 合成抑制剂可逆地抑制DNA 合成而不影响其他期细胞沿周期运转,最终可将细胞群体阻断在S期。高浓度TdR 对S期细胞的毒性较小,阻断效果较好,因此成为较常使用的S期阻断剂
优点:同步化程度高,适用于任何培养体系,可将几乎所有的细胞同步化。
缺点:诱导过程造成细胞非均衡生长(蛋白质、RNA 合成并不停止),细胞体积增大,较正常细胞在周期上有差异,有时出现有丝分裂和染色体的异常。
2.2 DNA分裂中期阻断法
TDR双阻断法: 是最常使用的方法 向对数增殖期的培养细胞的培液中加入TdR ,使细胞阻于S期和G1-S 期交界处。移去TdR ,洗涤细胞。当释放时间大于ts 时,所有细胞均脱离S期,这时再给予第二次TdR 阻断。细胞群体再经过G2+M+G1 的时间,则细胞阻断于G1-S 交界处的一个狭窄的区段中(tG1+tG2+tm >ts )。
某些药物可抑制微管的聚合,将细胞阻断于有丝分裂中期。非平衡生长问题不十分明显。但长时阻断释放后许多
1.自然同步化
自然同步化在自然界中,细胞自然同步化的现象在动、植物及粘菌中都有所发现,它们不受人为条件的干扰,因而有可能在接近自然的条件下进行观察。
缺点:自然同步化受到很多条件的限制。
2.人工选择同步化
人工选择同步化:人为的将处于不同细胞周期的细胞分离开,从而获得不同时期细胞群体的方法。
人工选择同步化的方法:
有丝分裂选择法(反复振摇法)
利用有丝分裂细胞变圆隆起,与培养皿的附着性降低的特点。此法的特点是细胞不受药物等的伤害,同步化程度高,放入37℃环境中,收集的细胞即可同步分裂。缺点是分裂细胞一般占1%-2 %,分离的细胞数量少。
根据周期时相不同而细胞大小不同。
此法的优点是:简单、成本低。
缺点是:同步程度有限,因同一时相的细胞大小并非都一致,而且对大多数种类的细胞不适用。
3.人工诱导同步化
2.1 S期DNA 合成阻断法
S期DNA 合成阻断法:选用DNA 合成抑制剂可逆地抑制DNA 合成而不影响其他期细胞沿周期运转,最终可将细胞群体阻断在S期。高浓度TdR 对S期细胞的毒性较小,阻断效果较好,因此成为较常使用的S期阻断剂
优点:同步化程度高,适用于任何培养体系,可将几乎所有的细胞同步化。
缺点:诱导过程造成细胞非均衡生长(蛋白质、RNA 合成并不停止),细胞体积增大,较正常细胞在周期上有差异,有时出现有丝分裂和染色体的异常。
2.2 DNA分裂中期阻断法
TDR双阻断法: 是最常使用的方法 向对数增殖期的培养细胞的培液中加入TdR ,使细胞阻于S期和G1-S 期交界处。移去TdR ,洗涤细胞。当释放时间大于ts 时,所有细胞均脱离S期,这时再给予第二次TdR 阻断。细胞群体再经过G2+M+G1 的时间,则细胞阻断于G1-S 交界处的一个狭窄的区段中(tG1+tG2+tm >ts )。
某些药物可抑制微管的聚合,将细胞阻断于有丝分裂中期。非平衡生长问题不十分明显。但长时阻断释放后许多
