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从人尿中提取尿激酶及激肽释放酶

2015-03-24 17:21阅读:
从人尿中提取尿激酶及激肽释放酶
罗 虹  周 昕  刘传湘
【摘要】 用大孔树脂从人尿中提取尿激酶后再提激肽释放酶. 所得粗品尿激酶比活达561. 6 IU /m g. 收率达
80%; 激肽释放酶比活达26 IU/ mg , 收率达64. 9%. 整个工艺简单、快速、稳定, 有较大推广潜力.
主题词 尿激酶; 大孔树脂; 激肽释放酶; 脱乙酰几丁
分类号 R931. 6
尿激酶( U rokinase) 和人尿激肽释放酶( Kall ikrein) 可从人尿中提取, 其临床应用的优越
已被行家关注. 尿激酶已收入我国1995 版药典第二部[ 1] , 且国内有较高精制水平; 人尿激肽释
放酶的应用前景也越来越受重视, 但目前两者在我国粗品来源不足, 从人尿中能同时提取几种
生化药物更具社会效益和经济效益. 近年来我国对人尿综合开发有些报道, 如超滤法提取表皮
生长因子、尿激酶及清蛋白[ 2] 以及从提取尿激酶后的残液中同时提取尿胰蛋白酶抑制剂
( UT I) 和集落刺激因子( CSF) 等[ 3] . 但这些方法主要缺点是成本高、工艺复杂、回收率也不理
想, 在我国推广使用有一定难度. 在前期工作中[ 4] 已筛选出一种优良的新型弱酸性大孔离子交
换树脂, 能从不经预处理的尿液中直接快速提取尿激酶后, 再用脱乙酰几丁提取人尿激肽释放
酶, 所得收率、比活均较满意.
1 材料与方法
1. 1 试剂和主要仪器
7 ( 戌二酰甘氨酰精氨酰胺基) 4
br>甲基香豆素( GGA MCA ) , 胰蛋白酶抑制剂, 美国
Sigma 公司; 尿激酶标准品, 中国药品生物制品检定所; 激肽释放酶, 山东省药品检验所; N
甲酰- 人- 精氨酸乙酯( BAEE) , 上海生物化学研究所; HD 2 弱酸性树脂, 上海华东理工大
学华震科技贸易公司; 脱乙酰几丁, 自制.
M750 微量可见紫外分光光度计, 江苏泰州无线电仪器厂; F950 荧光分光光度计, 上海第
三分析器厂.
1. 2 检测方法
尿激酶活性采用荧光法[ 5] ; 激肽释放酶活性采用文献[ 6] 法测定, 每管另加胰蛋白酶抑制剂
0. 2 ml ( 2 g/ L) ; 蛋白质含量采用紫外吸收法测吸光度A 280
[ 7] .
1. 3 实验方法
( 1)  工艺路线:
尿激酶粗品
( 2)  工艺步骤: ( 1) 粗品尿激酶的提取: 10 L 新鲜男性尿各4 份, 浓度3. 0 IU / ml, 各加尿量http://www.urine-extract.com/技术参考详细-2-0.html

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