新浪博客

淋巴细胞亚群（TBNK）检测中的质量控制（2015年第2期）

2015-01-10 13:45阅读：

http://blog.sina.cn/dpool/blog/u/2973261021

质量控制在淋巴细胞亚群（TBNK）检测中发挥着至关重要的作用。哪些因素会影响到质量控制？质控过程中有哪些事项需要注意？……本文将为您做简要介绍。
1. 阈值
阈值是最容易被忽略的一个因素。在日常工作中，很多操作者习惯使用FSC信号作为阈值，但如果设置不恰当（如设置过高的阈值），会有淋巴细胞或绝对计数微球“丢失”，可能导致错误的检测结果（图1）。由于上述FSC使用中的潜在问题，因此建议大家在做TBNK时采用CD45荧光信号作为阈值。使用荧光信号做阈值的好处是，细胞碎片离淋巴细胞和微球较远，即使将阈值调得略高也不会“砍掉”这些目标粒子。
淋巴细胞亚群（TBNK）检测中的质量控制（2015年第2期）
2. 电压（或增益）
每天测定样本前，使用生产商推荐的标准荧光微球对各通道信号进行标定，通过调节电压（或增益）使各通道信号峰都位于特定的靶值。这样做的目的是为了保证荧光范围的重复性和细胞位置的标准化。
3. 抗体组合
标准的抗体组合必须是包含CD45抗体的三色或四色抗体，这是因为CD45-SSC散点图中淋巴细胞和单核细胞边界明显，且很少受到细胞碎片的干扰。目前，国内仍有一部分实验室采用不含CD45的双色或单色抗体进行CD19+（B细胞）和CD56+（和/或CD16+）（NK细胞）的检测，应注意其与标准抗体组合的测定结果间可能存在较大差异。
淋巴细胞亚群（TBNK）检测中的质量控制（2015年第2期）

4. 设门策略
以CD4+、CD8+细胞检测为例，公认的标准化分析策略如图3所示，报告结果中包括CD3和CD4全部双阳性的细胞以及CD3和CD8都为阳性的细胞。
淋巴细胞亚群（TBNK）检测中的质量控制（2015年第2期）
但目前国内仍有很多实验室使用非标准化的分析策略（图4）。这个策略会将CD3+CD4+CD8+的细胞排除在外，因此其结果会较标准分析策略的结果偏低。
淋巴细胞亚群（TBNK）检测中的质量控制（2015年第2期）
5. 荧光补偿
当光学系统发生改变时，可能会引起荧光强度的变化，从而影响相邻荧光通道间的荧光补偿，因此应定期使用单染细胞或补偿微球进行补偿设置。由于补偿微球的荧光素发射光谱或数量可能与细胞上的标记抗体的有差异，因此使用微球完成荧光补偿后还应使用细胞做进一步确认。
6. 可靠性验证
标准四色抗体组合方案中,标本管间CD3+T细胞计数的差异应≤3%。超过上述控制范围时，考虑标本中可能包含大量CD4-CD8-或CD4+CD8+的T细胞。此外，CD4+细胞%与CD8+细胞%总和等于CD3+细胞%±5%，最大不超过±10%。另外，T细胞、B细胞、NK细胞总和应等于100%±5%。
7. 其他
此外，建议每天使用全血质控物对样本前处理、测试、数据处理等过程进行监控。另外，在更换不同批号试剂前对两种批号的试剂进行平行对比测试。此外，应定期进行仪器间的一致性监测，并定期对仪器性能（散射光/荧光灵敏度灵敏度、精密度、表面标志物重复性/准确性、携带污染率等）进行检测，方法请参考相关文献。
从上边的介绍来看，质量控制是不是一个纷繁复杂的工程？是不是有些让人“望而却步”？不过不用担心，像迈瑞公司推出的BriCyte E6流式细胞仪可以提供全面解决方案，让TBNK检测的质量控制变得异常简单，有机会来体验一下吧！
淋巴细胞亚群（TBNK）检测中的质量控制（2015年第2期）
（转自 “迈瑞流式”微信订阅号）

我的更多文章

下载客户端阅读体验更佳

APP专享