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如何评价流式细胞仪的荧光灵敏度（2015年第5期）

2015-02-05 11:11阅读：

http://blog.sina.cn/dpool/blog/u/2973261021

荧光灵敏度是评价流式细胞仪的重要指标，它是指流式细胞仪能够检测到的最小荧光分子数，是反映仪器辨别微弱荧光和背景光能力的指标，通常用MESF（molecules of equivalent soluble fluorochrome，等价可溶性荧光素分子）来表示。什么是“MESF”呢？下面举个例子来说明。例如，迈瑞BriCyte E6流式细胞仪宣称它的荧光灵敏度为“FITC≤100 MESF”，是指其FITC通道能够检测的最小荧光强度至少要等价于“含有100个FITC分子的溶液所具有的荧光强度”。

1. 我们需要极低的荧光灵敏度吗？
根据MESF的概念有人会说，荧光灵敏度一定是越低越好，因为这意味着流式细胞仪可以检测到更小荧光强度的分子。更有甚者，为了吸引用户的眼球，现在一些生产厂家也喜欢宣称自己的荧光灵敏度能做到几十个甚至几个MESF。但极低的荧光灵敏度真的对日常临床或科研工作有实际意义吗？我们来看一组数据后再来回答这个问题。
Schwartz是最早提出以MESF作为荧光灵敏度检测指标的学者。他在1996年的文章（Cytometry A. 1996, 26:22-31.）中介绍了美国60多个实验室针对白细胞自发荧光所测定的结果。其中，淋巴细胞的自发荧光为657±270 MESF（FITC），单核细胞为928±373 MESF、中性粒细胞1200±697 MESF。因此作者认为，对于一个定量检测项目来说荧光灵敏度为1000 MESF是可以接受的，因为日常工作中使用的细胞的自发荧光都接近这个数值。
如何评价流式细胞仪的荧光灵敏度（2015年第5期）
从上面的数据可以看出，如果我们的检测对象是淋巴细胞等细胞类物质，真的不需要极低的荧光灵敏度。几百个MESF的检测性能足以让我们看到阴性细胞的位置，而阳性细胞的荧光强度又往往是阴性细胞的几十倍，甚至上百倍。而临床或科研上对细胞进行鉴别主要是利用阴/阳性细胞间荧光强度的差别，而非最低荧光灵敏度。所以对于大多数用户来说，真的没有必要一味追求极低的荧光灵敏度。

2. 如何测定流式细胞仪的荧光灵敏度？
荧光灵敏度的评价较为复杂。下面以迈瑞BriCyte E6流式细胞仪为例，介绍具体的评价方法。
如何评价流式细胞仪的荧光灵敏度（2015年第5期）
1. 使用多峰微球（Rainbow Calibration Particles，8-peaks）在流式细胞仪上检测，得到空白微球（P0）和7个荧光微球峰（P1-P7）的平均荧光强度（对数）；
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2. 按下面公式，将P0-P7的荧光强度（对数）转换成荧光道数（线性256）；
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3. 以P1-P7的荧光道数为x轴、以说明书中提供的相应荧光微球的MESF（对数）为y轴作图，并求出线性回归方程；
如何评价流式细胞仪的荧光灵敏度（2015年第5期）
4. 将空白微球（P0）的荧光道数带入线性回归方程，即可获得以MESF表示的荧光灵敏度。如图所示，迈瑞BriCyte E6流式细胞仪实测的FITC和PE通道的荧光灵敏度分别为87和43 MESF，远低于国家标准《YY/T 0588-2005 流式细胞仪》中FITC≤200 MESF，PE≤100 MESF的技术要求。
如何评价流式细胞仪的荧光灵敏度（2015年第5期）

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