一、实验原理
银染是一种重要的PAGE染色方法，由于其成本低，所用试剂安全、快速、灵敏度高而被广泛应用。银染的原理是银离子在碱性pH 环境下被还原成金属银，沉淀在蛋白质的表面上而显色。由于银染的灵敏度很高，可染出凝胶上低于1 ng/蛋白质点，故广泛的用在2D凝胶分析上，及极低蛋白含量测定的垂直凝胶中。这里介绍的是一种实验室常用的银染方法，主要是用于垂直凝胶电泳中低丰度蛋白的检测。
二、实验试剂
1. 乙醇、冰醋酸、乙酸钠、硫代硫酸钠、硝酸银、碳酸钠、甘氨酸或EDTA钠盐、去离子水、甲醛。
三、实验步骤
1. 固定
量取100ml 乙醇，25ml 冰醋酸加去离子水到250ml(视胶板大小情况，适当等比例配制，增加固定液量，以下相同。)，使其终浓度达到 40% 乙醇，10% 冰醋酸。将凝胶板浸入固定液中，固定30min以上。
2. 水洗
去离子水浸泡。3x 10 min。
2. 致敏
量取75ml 乙醇，17g 乙酸钠或28.2g三水乙酸钠，0.5g硫代硫酸钠加去离子水到体积250ml。将固定后的凝胶板拿起，浸入致敏液中，浸泡30 min。
4. 水洗
去离子水浸泡。3x 10 min。
5．银染
0.625g AgNO3、100 ul 37%甲醛（在使用前加入）加去离子水到终体积250ml。将胶板浸入银染液中，浸泡30 min。
6．水洗
去离子水浸泡。3x 20 sec。注意把握时间，水洗时间长显色速度慢，点的颜色偏黄色。水洗不充分，背景较深。
7．显色
6.25 g Na2CO3、50 ul 37% 甲醛（在使用前加入）加去离子水到终体积250ml。2-15min，显色时间视凝胶大小、厚薄情况而定。看到各条带，即可将凝胶捞出。
8．终止
3.65g EDTA钠盐或者1g 甘氨酸加去离子水到终体积250ml。浸泡凝胶10 min。
9．保存
1% 冰醋酸，4 ℃。
四、注意事项
1．银染主要出现在胶的表面，用薄胶（0.5-0.75mm）可以提高灵敏度。
2．固定时间较长，则加一步水洗30min，以免胶太脆而破碎。
3．最好多配制一份显色液，第一次显
银染是一种重要的PAGE染色方法，由于其成本低，所用试剂安全、快速、灵敏度高而被广泛应用。银染的原理是银离子在碱性pH 环境下被还原成金属银，沉淀在蛋白质的表面上而显色。由于银染的灵敏度很高，可染出凝胶上低于1 ng/蛋白质点，故广泛的用在2D凝胶分析上，及极低蛋白含量测定的垂直凝胶中。这里介绍的是一种实验室常用的银染方法，主要是用于垂直凝胶电泳中低丰度蛋白的检测。
二、实验试剂
1. 乙醇、冰醋酸、乙酸钠、硫代硫酸钠、硝酸银、碳酸钠、甘氨酸或EDTA钠盐、去离子水、甲醛。
三、实验步骤
1. 固定
量取100ml 乙醇，25ml 冰醋酸加去离子水到250ml(视胶板大小情况，适当等比例配制，增加固定液量，以下相同。)，使其终浓度达到 40% 乙醇，10% 冰醋酸。将凝胶板浸入固定液中，固定30min以上。
2. 水洗
去离子水浸泡。3x 10 min。
2. 致敏
量取75ml 乙醇，17g 乙酸钠或28.2g三水乙酸钠，0.5g硫代硫酸钠加去离子水到体积250ml。将固定后的凝胶板拿起，浸入致敏液中，浸泡30 min。
4. 水洗
去离子水浸泡。3x 10 min。
5．银染
0.625g AgNO3、100 ul 37%甲醛（在使用前加入）加去离子水到终体积250ml。将胶板浸入银染液中，浸泡30 min。
6．水洗
去离子水浸泡。3x 20 sec。注意把握时间，水洗时间长显色速度慢，点的颜色偏黄色。水洗不充分，背景较深。
7．显色
6.25 g Na2CO3、50 ul 37% 甲醛（在使用前加入）加去离子水到终体积250ml。2-15min，显色时间视凝胶大小、厚薄情况而定。看到各条带，即可将凝胶捞出。
8．终止
3.65g EDTA钠盐或者1g 甘氨酸加去离子水到终体积250ml。浸泡凝胶10 min。
9．保存
1% 冰醋酸，4 ℃。
四、注意事项
1．银染主要出现在胶的表面，用薄胶（0.5-0.75mm）可以提高灵敏度。
2．固定时间较长，则加一步水洗30min，以免胶太脆而破碎。
3．最好多配制一份显色液，第一次显