ras基因和结构
Ras基因首先在Harvery鼠肉瘤病毒和Kirsten鼠肉瘤病毒的子代基因中被发现
哺乳动物ras基因家族：H-ras，K-ras，N-ras
K-ras基因位于12号染色体短臂上，35kb
Ras蛋白——膜结合型GTP/GDP结合蛋白，位于细胞膜内侧，在传递细胞生长分化信号方面起重要作用。
Ras基因的激活方式
作为原癌基因的ras 基因被激活后就变成有致癌活性的癌基因, ras基因激活的方式有3种:
(1)基因点突变—最常见方式，多发生在codons12，13，61
(2)基因过表达
(3)基因插入及转位
K-ras癌蛋白
正常情况下处于激活的GTP结合状态和失活的GDP结合状态的循环中
Ras蛋白发生构型改变，功能也随之改变
与GDP结合能力减弱，而和GTP解离减少，从而失去GTP与GDP有节制的调节
K-ras基因的临床应用
Ras基因在肿瘤中的突变率10%-100%
1.诊断
2.病情评估及预后判断
3.基因的靶向治疗
K-ras突变在结肠癌中的作用
Kevin M Haigis等人研究报道：
K-ras突变可诱导结肠粘膜的腺上皮过度增生，与肿瘤抑制基因APC 联合作用促使结肠癌变
K-ras突变可促进肿瘤的恶性进展
此外，N-ras突变与P53的作用相似，可抑制细胞的凋亡。
K-ras基因突变的检测方法
常用方法
直接测序
K-ras 突变检测流程
肿瘤手术标本（新鲜标本或蜡块）
肿瘤DNA提取
传统PCR扩增
DNA测序
基本步骤：高质量的 PCR 反应原液 →琼脂糖凝胶电泳纯化 →DNA测序仪→自动分析软件输出碱基排列顺序→判读结果
ABI3730XL测序仪为世界最先进的DNA测序仪
测序结果影响因素分析
石蜡包埋组织提取DNA的质和量
传统PCR易于产生污染
产物纯化及DNA测序不可控
抗EGFR治疗前检测KRAS 基因突变状态的四个理由
避
Ras基因首先在Harvery鼠肉瘤病毒和Kirsten鼠肉瘤病毒的子代基因中被发现
哺乳动物ras基因家族：H-ras，K-ras，N-ras
K-ras基因位于12号染色体短臂上，35kb
Ras蛋白——膜结合型GTP/GDP结合蛋白，位于细胞膜内侧，在传递细胞生长分化信号方面起重要作用。
Ras基因的激活方式
作为原癌基因的ras 基因被激活后就变成有致癌活性的癌基因, ras基因激活的方式有3种:
(1)基因点突变—最常见方式，多发生在codons12，13，61
(2)基因过表达
(3)基因插入及转位
K-ras癌蛋白
正常情况下处于激活的GTP结合状态和失活的GDP结合状态的循环中
Ras蛋白发生构型改变，功能也随之改变
与GDP结合能力减弱，而和GTP解离减少，从而失去GTP与GDP有节制的调节
K-ras基因的临床应用
Ras基因在肿瘤中的突变率10%-100%
1.诊断
2.病情评估及预后判断
3.基因的靶向治疗
K-ras突变在结肠癌中的作用
Kevin M Haigis等人研究报道：
K-ras突变可诱导结肠粘膜的腺上皮过度增生，与肿瘤抑制基因APC 联合作用促使结肠癌变
K-ras突变可促进肿瘤的恶性进展
此外，N-ras突变与P53的作用相似，可抑制细胞的凋亡。
K-ras基因突变的检测方法
常用方法
直接测序
K-ras 突变检测流程
肿瘤手术标本（新鲜标本或蜡块）
肿瘤DNA提取
传统PCR扩增
DNA测序
基本步骤：高质量的 PCR 反应原液 →琼脂糖凝胶电泳纯化 →DNA测序仪→自动分析软件输出碱基排列顺序→判读结果
ABI3730XL测序仪为世界最先进的DNA测序仪
测序结果影响因素分析
石蜡包埋组织提取DNA的质和量
传统PCR易于产生污染
产物纯化及DNA测序不可控
抗EGFR治疗前检测KRAS 基因突变状态的四个理由
避