Western Blot常见问题及处理-非常有用！ 

以下内容来自于em.ureach的博客，新手们值的一看：
Western Blot常见问题及处理(二)
1．电泳中常出现的一些现象：
　　●︶ 条带呈笑脸状
原因：凝胶不均匀冷却，中间冷却不好; 电泳系统温度偏高。
　　●︵ 条带呈皱眉状
原因：可能是由于装置不合适，特别可能是凝胶和玻璃挡板底部有气泡，或者两边聚合不完全。
　　●拖尾
原因：样品溶解不好。
　　●纹理（纵向条纹）
原因：样品中含有不溶性颗粒。
　　●条带偏斜
原因：电极不平衡或者加样位置偏斜。
　　●条带两边扩散
原因：加样量过多。
2．Western blot结果中背景较高
可能的原因及建议：
　　●膜封闭不够
延长封闭的时间；选择更加适合的封闭液。
　　●一抗稀释度不适宜
对抗体进行滴度测试，选择最适宜的抗体稀释度。
　　●一抗孵育的温度偏高
建议4℃结合过夜。
　　●选择的膜容易产生高背景
一般硝酸纤维素膜的背景会比PVDF膜低。
　　●膜在实验过程中干过
实验过程中要注意保持膜的湿润。
　　●检测时曝光时间过长
减少曝光时间。
3．Western blot结果中杂带较多
可能的原因及建议：
　　●目的蛋白有多个修饰位点（磷酸化位点、糖基化位点、乙酰化位点等），本身可以呈现多条带。
查阅文献或进行生物信息学分析，获得蛋白序列的修饰位点信息，通过去修饰确定蛋白实际大小。
　　●目的蛋白有其它剪切本
查阅文献或生物信息学分析可能性。
　　●样本处理过程中目的蛋