一、取清洁干燥的血球计数板，加盖玻片盖住网格和两边的槽。
二、将待测菌液充分摇匀后，用无菌吸管吸少许，由盖玻片边缘或槽内加入计数板，使其自行渗入计数室内，计数室内不能有气泡。静置5~10分钟。
三、在低倍镜下找到小方格网后更换高倍镜观察计数，上下调动细准焦螺旋，以便看到小室内不同深度的菌体。位于分格线上的菌体，只数两条边上的，其余两边不计数，即数上线就不数下线，数左边线就不数右边线。
四、计数时，若使用刻度为25中方格×16小方格的计数板，计数四个角的4个中方格，及中央1个中方格的菌数（即80小方格）；若使用刻度为16中方格×25小方格的计数板，就数四个角的4个中方格（即100小方格）内的菌数。每小方格中菌数以5~10个为宜，如菌液过浓可适当稀释。
五、每个样品重复计数2~3次，取其平均值，按下式计算样品中的菌数。
刻度为25中方格×16小方格的计数板：每毫升菌数=80小格内的菌数/80×4×106×稀释倍数。
刻度为16中方格×25小方格的计数板：每毫升菌数=100小格内的菌数/100×4×106×稀释倍数。
二、将待测菌液充分摇匀后，用无菌吸管吸少许，由盖玻片边缘或槽内加入计数板，使其自行渗入计数室内，计数室内不能有气泡。静置5~10分钟。
三、在低倍镜下找到小方格网后更换高倍镜观察计数，上下调动细准焦螺旋，以便看到小室内不同深度的菌体。位于分格线上的菌体，只数两条边上的，其余两边不计数，即数上线就不数下线，数左边线就不数右边线。
四、计数时，若使用刻度为25中方格×16小方格的计数板，计数四个角的4个中方格，及中央1个中方格的菌数（即80小方格）；若使用刻度为16中方格×25小方格的计数板，就数四个角的4个中方格（即100小方格）内的菌数。每小方格中菌数以5~10个为宜，如菌液过浓可适当稀释。
五、每个样品重复计数2~3次，取其平均值，按下式计算样品中的菌数。
刻度为25中方格×16小方格的计数板：每毫升菌数=80小格内的菌数/80×4×106×稀释倍数。
刻度为16中方格×25小方格的计数板：每毫升菌数=100小格内的菌数/100×4×106×稀释倍数。