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万万没想到胞外miRNA是这样被发现的!!

2015-07-03 09:41阅读:
万万没想到胞外miRNA是这样被发现的!!张辰宇是国内生命科学领域少有的、有自己独创概念的学者,其主要的工作都集中在miRNA方面。关于miRNA的介绍很多,这里不做科普。
2007年的某一个星期四,由于时间久远,具体日期已不可考。在日后名动南京生命科学界的M3组会上,张辰宇(南京大学生命科学院院长)向博士一年级的研究生陈熹布置了一个新课题,要他在血清中测定microRNA。虽然M3实验室的师生们已经敬畏地适应了张辰宇天马行空般的胡思乱想,但第一次听说这个从理论上匪夷所思的新“假说”,参加组会所有人都只能是大眼瞪小眼,沉默以对。
该要求就像一枚纸片投到了秋天的玄武湖里,湖面保持了和谐的镜面般平静,连是否产生了可见的波纹都不能肯定。但事后得知,在浑浊如磨砂玻璃的水面下,陈熹这条黑鱼在嗅了嗅纸片后,还是对实验室里的鱼儿们冒了几个泡。
由于经典的概念是RNA在细胞外不稳定被RNA水解酶降解,而细胞外、血清/血浆和体液中充满了
RNA水解酶,所以在细胞外和血清不应该存在完整的RNA,只能存在一些不规则的片段,因此和国际上其它实验室一样,M3实验室到此为止研究的是细胞内microRNA的表达谱和相关的功能,张辰宇也显示了其是受过良好科研训练,具有科学逻辑的研究者。但在2007年某个神秘的不可考的日子里,张辰宇大脑的某些沟回、突触发生了短路,坚定地认为血清/血浆中有完整的microRNA存在。其间的心路历程,由于现在张辰宇坚不吐口,只能暂且存疑。
而陈熹也竟然没有去做实验!他对实验室的师弟师妹们,特别是师妹们冒了几个诽谤的小泡:“老板就是疯了,这又不是人有多大胆地有多大产,他说有就有啊,我是南大本科直接上来的研究生,受过严格的科学的生命科学研究训练,我决不会浪费我的时间去证明他是错的!”伴随着这铿锵有力的泡泡,师妹们对他的景仰之情,顿时如滔滔江水绵绵不绝,其娇小的1.70米的身躯在师妹们的眼中也伟岸起来,远远超过了同是1.70丰满的张辰宇……
在那次组会后,因暴躁的星星教授一反常态地未步步紧逼,反而使得M3实验室内紧张气氛随着时间的推移而稳步增长。伟岸的陈熹终于因恐惧而大失心疯,不仅强吃师妹的盐水鸭,还朝剩下的鸭子吐口水,让实际主人不能再染指而自己独享。在大师姐张燕的监督下,陈熹被愤怒的晓红师妹直接追打进了男厕所。但实际情况给大家开了个小玩笑,张辰宇在组会上说完后,出差开了几个会,G点尚在远方,大家的紧张与恐惧都是表错情了。
虽然张辰宇20年来从事科研的座右铭是甭废话,少管理论,直接做,只有做了才知道对不对,行不行,但这次连具体怎么做实验还没想好,也就没有象往常一样用电话push。不过当他刚回到实验室,抱头逃窜的陈熹就一下子勾起了他的怒火:我交给你的实验,我没想好怎么做,你就不想啊!
于是在第二天早晨,在那次组会的两星期后,轻轻地,悄悄地,张辰宇来了;张辰宇挥了挥衣袖,截住了上半夜实验,下半夜游戏,半梦半醒之间的陈熹。
“啊?!老板!您这么早就过来啦”
“…………”
“我,我刚做完实验,正要回去睡一会儿,嘿嘿嘿”
“…………”
“我上半夜真是做实验了,真的,郭星和我一起做的,我只在两点后玩了一会儿“魔兽”。我知道张燕师姐说我自己不亲手做实验,只让师弟师妹们做,您看,我立马改正了。您看这堆枪头就是我做实验的, …………啊,不好意思,不好意思,我马上把这些废枪头扔了,以后做完实验就扔”
“…………”
“…………。您来的这么早,肯定没吃早饭,要不我到食堂给您买点儿去?您想吃点什么?”
“吃你个头啊,我两星期前让你做的实验,怎么样了”
“嗯……两星期前……奥……..……没做”
“你再装,接着装!有plan了吗?”
“我的UCP2实验很忙,还带着……”
“我不打电话push,你就不做啊,我没想好怎么做,你就不想啊!现在就做”
“您不是也没想好怎么做么,怎么做?”
“嗯……用血清做,用血清直接RT后,再做PCR
“用血清直接RT……,那反应buffer就不能加够了,您的反应体系……?”
“你动动脑子,buffer里有什么?是干什么用的?血清就是最好的buffer,生化反应在血清里最好,血清本身就是是一个最适合的反应环境,buffer都是模仿血清条件的!”
buffer都是模仿血清条件的?没听说过!”
“#¥%@##%¥#……¥%”
“好好好,我做,我马上做,那血清从哪儿来?”
“用我的!”
“用你的?那好,用您的。奥,你们大家都已经来了,正好,郭星,你赶紧去准备分离血清用的试管;张燕,麻烦你给张老师采血,我要用张老师的血清亲自做RT;晓红,你再去买点盐水鸭呗,不是我要吃,是给老板补补”
“只抽10毫升的血,用得着你这么忙乎吗?赶紧抽血,也准备分离血浆的试管,各5ml装在不同的试管里,一半分离血清,一半分离血浆,用血清和血浆分别同时做RT,我就在这坐着等结果。那什么,晓红,你昨天为啥追杀陈熹啊?曾老师还没来啊?打他手机,请他过来,正好商量一下下一步怎么做”。
那时实验室里有大约450microRNA检测用的引物。陈熹随机地挑选了10多种microRNA实施检测。他在每个RT的反应体系里,直接加了6ul的血清或血浆,剩下的4ul就是反应必须的RT酶啊什么的,总共10ul,没有加平时反应所用的buffer。在取2ulRT的反应产物做下一步PCR时,陈熹发现无论血清还是血浆直接检测的反应体系里,都有一些凝结物,但用枪头挤压一下后,也能取到足够量的产物做PCR
SYBRgreen半定量检测microRNA体系的最后一步是用PCR的产物去run gel,通过观察在gel上的相应位置出不出现band,来判定是否检测到microRNA,也就是是否有microRNA存在。
当陈熹在用PCR产物上样时,全实验室的鱼儿们都围着他,叽里哇啦地乱说着什么。陈熹其实很得意于大家围着他的成就感,但嘴里还是嘟囔着“走开走开,别影响我上样,帮我把这些废枪头扔掉,否则老板又要收拾我了”。
张燕从休息室走过来说“你在嘟囔什么那!老板已经走了”
陈熹一愣“老板不是说要等着结果么。他也紧张了!”
“什么呀,老板和曾老师早走了”。
后来张辰宇说:看到陈熹实际去做了检测血清中是否存在microRNA的实验后,对于是阴性结果还是阳性结果反而没什么感觉了。好像也不是特别的自信,自己的假说一定正确,肯定会检测出来;当然也希望是阳性结果,但当时设计实验时的激情好像随着实验的实施而消散了。
总而言之,当陈熹在实验室鬼哭狼嚎的背景里电话报告说:“张老师,真检测到了,血清血浆里都有”时,张辰宇只说“OK,服不服?把RNA从血清中提出来后,再做RTPCR,和血清/血浆直接测的比较一下,是否是同样的pattern,明天早晨告诉我结果”。一转脸,对曾科说“陈熹测出来了,血清/血浆中都有。虽然好像不是在设计实验时那么激动,但我还是觉得我TM现在真象围城里的一个姓梅的教务长,恨不得再生出两根胳膊来拥抱自己“姓张的,你真TM行!”
……
以上都是张辰宇教授的博客原文,没有杜撰哈……国内做点原创性的东西太难了,给张教授点个赞。
目前张教授的很多研究都很有争议,做miRNA研究的朋友,可以研究下他的文章噢~~~
张教授部分文章:
1)Identification and characterization of microRNAs in raw milk during different periods of lactation, commercial fluid, and powdered milk products.
2Secreted monocytic miR-150 enhances targeted endothelial cell migration.
3Exogenous plant MIR168a specifically targets mammalian LDLRAP1: evidence of cross-kingdom regulation by microRNA
4Reply to Lack of detectable oral bioavailability of plant microRNAs after feeding in mice

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