一、一般理化性质
1.DNA为白色纤维状固体,RNA为白色粉末;都微溶于水,不溶于一般有机溶剂。常用乙醇从溶液中沉淀核酸。
2.具有大分子的一般特性。分子大小可用Da、b或bp、S、链长(μm)表示。一个bp相当的核苷酸平均分子量为660Da;1μm长的DNA双螺旋相当3000bp或2×106Da。
3.两性电解质。各种核酸的大小及所带的电荷不同,可用电泳和离子交换法分离。RNA在室温下易被稀碱水解,DNA较稳定,此特性用来测定RNA的碱基组成和纯化DNA。
4.紫外吸收,最大吸收峰在260nm处,核酸的变性或降解,吸光度A升高,称为增色效应。
二、核酸的变性和复性
1.变性的概念
在理化因素作用下,核酸的双螺旋区氢键断裂,空间结构破坏,形成单链无规线团状态的过程。变性的因素有热、酸、碱、乙醇、尿素等。变性的本质是次级键的变化。变性的结果是紫外吸收值明显增加(增色效应),DNA粘度下降,生物学功能部分或全部丧失。
2.DNA的热变性和Tm
DNA热变性过程中,紫外吸收值增高,有一个特征性曲线称熔解曲线,通常将熔解曲线的中点,即紫外吸收值达到最大值50%时的温度称为解链温度,又叫熔点(Tm)。DNA的热变性是爆发式的,像结晶的溶解一样,只在很狭窄的温度范围内完成,一般在70~800C之间。变性温度与碱基组成、DNA长度及变性条件有关。GC含量越高,Tm越大;DNA越长,Tm越大;溶液离子强度增高,Tm增加。
3.DNA的复性与分子杂交
变性DNA在适当条件下,两条互补链可重新配对,恢复天然双螺旋构象,这一现象称为复性。热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性,这一过程称为退火(annealing)。
影响复性速度的因素很多,如单链DNA的起始浓度、温度(最适复性温度是比Tm约低250C)、盐浓度、片断长度、序列复杂性等。
分子杂交是以核酸的变性和复性为基础,只要不同来源的核酸分子的核苷酸序列含有可以形成碱基互补配对的片
1.DNA为白色纤维状固体,RNA为白色粉末;都微溶于水,不溶于一般有机溶剂。常用乙醇从溶液中沉淀核酸。
2.具有大分子的一般特性。分子大小可用Da、b或bp、S、链长(μm)表示。一个bp相当的核苷酸平均分子量为660Da;1μm长的DNA双螺旋相当3000bp或2×106Da。
3.两性电解质。各种核酸的大小及所带的电荷不同,可用电泳和离子交换法分离。RNA在室温下易被稀碱水解,DNA较稳定,此特性用来测定RNA的碱基组成和纯化DNA。
4.紫外吸收,最大吸收峰在260nm处,核酸的变性或降解,吸光度A升高,称为增色效应。
二、核酸的变性和复性
1.变性的概念
在理化因素作用下,核酸的双螺旋区氢键断裂,空间结构破坏,形成单链无规线团状态的过程。变性的因素有热、酸、碱、乙醇、尿素等。变性的本质是次级键的变化。变性的结果是紫外吸收值明显增加(增色效应),DNA粘度下降,生物学功能部分或全部丧失。
2.DNA的热变性和Tm
DNA热变性过程中,紫外吸收值增高,有一个特征性曲线称熔解曲线,通常将熔解曲线的中点,即紫外吸收值达到最大值50%时的温度称为解链温度,又叫熔点(Tm)。DNA的热变性是爆发式的,像结晶的溶解一样,只在很狭窄的温度范围内完成,一般在70~800C之间。变性温度与碱基组成、DNA长度及变性条件有关。GC含量越高,Tm越大;DNA越长,Tm越大;溶液离子强度增高,Tm增加。
3.DNA的复性与分子杂交
变性DNA在适当条件下,两条互补链可重新配对,恢复天然双螺旋构象,这一现象称为复性。热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性,这一过程称为退火(annealing)。
影响复性速度的因素很多,如单链DNA的起始浓度、温度(最适复性温度是比Tm约低250C)、盐浓度、片断长度、序列复杂性等。
分子杂交是以核酸的变性和复性为基础,只要不同来源的核酸分子的核苷酸序列含有可以形成碱基互补配对的片
