新浪博客

ddPCR(即微滴式数字PCR )是第三代PCR技术

2013-12-18 14:07阅读:
    说起微滴式数字PCR,估计知道的人并不多。PCR就是聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)的简称,是一种分子生物学技术,可以用来放大特定的DNA片段,可以看作是生物体外的特殊DNA复制。ddPCR(即微滴式数字PCR )是第三代PCR技术,在传统的PCR扩增前对样品进行微滴化处理。
  Westernblot法和Digital PCR 及微滴式PCR 是什么?
 PCR反应的基本成分包括:模板DNA(待扩增DNA)、引物、4种脱氧核苷酸(dNTPs)、DNA聚合酶和适宜的缓冲液。类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的高温变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;②模板DNA与引物的低温退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③引物的适温延伸:DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性-退火-延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟, 2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
Westernblot法和Digital PCR 及微滴式PCR 提醒我们:   
Digital PCR 是一种DNA绝对定量技术。Digital PCR 当前DNA定量有三种,光度法基于DNA分子的吸光度来定量;实时荧光定量也就是real time-PCR基于Ct值,也就是可以检测到荧光值对应的循环数定量;数字PCR是最新的定量技术,他基于单分子
PCR方法来采用计数的方法对DNA进行定量,Digital PCR 因此是一种绝对定量的工具。主要采用当前分析化学热门研究领域-微流控的方法,将大量的稀释后的DNA溶液分散至芯片的微反应器中,每个反应器的DNA模板数少于或者等于1个。这样经过PCR循环之后,有一个DNA模板的反应器就会亮,没有DNA模板的反应器就是暗的。根据相对比例和反应器的体积,就可以推算出原始溶液的DNA浓度。 Westernblot法和Digital PCR 及微滴式PCR 我们来看看详细说明
伯乐生命医学目前推出的ddPCR(即微滴式数字PCR)系统,带来了数字PCR(digitalpcr.cn)技术革 命新 浪潮。因为ddPCR(即微滴式数字PCR)系统能够确定核酸分子的绝对数目,让科研人员更加精确地研究生物学。ddPCR 克服了之前数字PCR系统的诸多缺陷,如成本高、通量有限并且流程复杂等。ddPCR(即微滴式数字PCR)的试验流程简单、又好:一次可处理8个样品;试验流程拓展性好,可在5小时内完成96个样品的分析;一天内更可运行多次实验满足高通量样品实验室的要求。

我的更多文章

下载客户端阅读体验更佳

APP专享