说起微滴式数字PCR,估计知道的人并不多。PCR就是聚合酶链式反应(Polymerase Chain
Reaction)的简称,是一种分子生物学技术,可以用来放大特定的DNA片段,可以看作是生物体外的特殊DNA复制。ddPCR(即微滴式数字PCR
)是第三代PCR技术,在传统的PCR扩增前对样品进行微滴化处理。
Westernblot法和Digital PCR 及微滴式PCR 是什么?
PCR反应的基本成分包括:模板DNA(待扩增DNA)、引物、4种脱氧核苷酸(dNTPs)、DNA聚合酶和适宜的缓冲液。类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的高温变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;②模板DNA与引物的低温退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③引物的适温延伸:DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性-退火-延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟, 2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
Westernblot法和Digital PCR 及微滴式PCR 提醒我们:
Digital PCR 是一种DNA绝对定量技术。Digital PCR 当前DNA定量有三种,光度法基于DNA分子的吸光度来定量;实时荧光定量也就是real time-PCR基于Ct值,也就是可以检测到荧光值对应的循环数定量;数字PCR是最新的定量技术,他基于单分子
Westernblot法和Digital PCR 及微滴式PCR 是什么?
PCR反应的基本成分包括:模板DNA(待扩增DNA)、引物、4种脱氧核苷酸(dNTPs)、DNA聚合酶和适宜的缓冲液。类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的高温变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;②模板DNA与引物的低温退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③引物的适温延伸:DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性-退火-延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟, 2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
Westernblot法和Digital PCR 及微滴式PCR 提醒我们:
Digital PCR 是一种DNA绝对定量技术。Digital PCR 当前DNA定量有三种,光度法基于DNA分子的吸光度来定量;实时荧光定量也就是real time-PCR基于Ct值,也就是可以检测到荧光值对应的循环数定量;数字PCR是最新的定量技术,他基于单分子
