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CycloheximideCHX的作用

2024-02-01 14:56阅读:
  Cycloheximide(Naramycin A)是真核生物蛋白质合成的抑制剂,抑制体内蛋白质合成和RNA合成的IC50值分别为532.5 nM和2880 nM。
  MCE的所有产品仅用作科学研究,我们不为任何个人用途提供产品和服务
  Cycloheximide的生物活性
  体外研究
  Cycloheximide(CHX)是最常用的用于抑制蛋白质合成的实验室试剂。Cycloheximide已显示可阻断真核翻译的延伸阶段。Cycloheximide结合核糖体并抑制eEF2介导的易位。令人惊讶的是,Cycloheximide允许一个完整的易位循环在停止任何进一步的延伸之前继续进行。Cycloheximide据推测,Cycloheximide需要E位点结合的脱酰tRNA才能发挥活性
  体内研究
  在用200μA电击训练之前,小鼠接受30、60或120 mg/kg的Cycloheximide注射。Cycloheximide对记忆测试试验的潜伏期有显著影响(P<0.001)。在盐水控制中,这种电击水平导致测试试验的延迟明显高于训练中的延迟。注射最低剂量的Cycloheximide测试,30 mg/kg,导致测试试验的潜伏期明显高于盐水对照组。接受两种较高剂量Cycloheximide中任一种的小鼠在测试试验中的潜伏期与盐水组相当,即在这些条件下较高剂量既不增强也不损害记忆,导致倒U型剂量反应曲线用于Cycloheximide增强记忆[2]。当在HI后0小时或6小时给予Cycloheximide时,梗塞体积通过三苯基氯化四唑(TTC)对梗塞区域的形态分析测量,分别显著减少92%和61%,但如果Cycloheximide则显示梗塞减少趋势不显著与HI对照组相比,在缺氧缺血(HI)后12小时给药,延迟至HI后24小时给药未观察到保护作用
  cycloheximide的实验参考方法
  细胞分析
  为了测试细胞增殖,将每孔3000-5
000个细胞(HeLa,HTB1和HEK 293T细胞;Jurkat,BT 474,HCC 1395,HCC 1937,HCC 2218和MDA MB231细胞;MCF 10A)接种在96孔板中并且允许坚持过夜。然后加入以指定浓度(0.1nM-1000μM)溶解在DMSO中的Cycloheximide,将细胞再温育24小时。以每孔1μCi加入[3H]-胸苷,并继续孵育另外7小时。用PBS洗涤细胞两次,然后用胰蛋白酶消化,然后用Tomtec收集器收集细胞并结合GF/C过滤垫。然后通过闪烁计数测量胸苷摄取。
  MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。
  cycloheximide的Animal Administration
  小鼠
  在该实验中使用雄性ICR小鼠(约2个月大)。CycloheximideCycloheximide以0(盐水对照),30,60或120mg/kg的浓度IP施用。在训练前30分钟施用Cycloheximide注射。120mg/kg剂量通常用于研究小鼠的健忘症。注意,在大鼠(1-3mg/kg)中遗忘的Cycloheximide剂量比在小鼠中低得多,这与大鼠和小鼠的LD50s的类似差异一致。注射后30-60分钟测量的Cycloheximide剂量为120-150mg/kg导致脑蛋白质合成的约95%抑制;30mg/kg的剂量产生约80%的脑蛋白质合成抑制。
  大鼠
  在甲氧氟烷麻醉下,在7日龄Sprague Dawley大鼠幼仔中进行单侧颈动脉结扎。颈部在中线切开,右颈总动脉用4-0丝永久结扎。每只动物的手术总时间从未超过5分钟。手术后,将大鼠返回母亲进行恢复并喂食2小时。然后将幼崽置于100分钟的缺氧期(8%O2,92%N2)中,将它们置于部分浸没在温控水浴中的气密室中,以使室内的环境温度保持恒定36°。C。在HI与Cycloheximide治疗组中,大鼠幼仔在恢复0,6,12或24小时时以0.6mg/kg的剂量腹膜内注射Cycloheximide,并向HI对照给予等体积的生理盐水。组。然后,将大鼠幼崽送回大坝直至牺牲;在HI后48和72小时分别在深度麻醉(60mg/kg,腹膜内)下进行流式细胞术和氯化三苯基四氮唑(TTC)获得全脑组织。
  MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

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