D-萤光素钠盐D-luciferin sodium 是荧光素酶 (Luc)
的天然底物,对萤火虫产生典型的黄绿光进行催化。该反应产生的 560 nm
化学发光在几秒钟内达到峰值,当底物荧光素过量时,光输出与荧光素酶浓度成正比。荧光素酶 (luc)
基因是研究和活性分子筛选的常用报告基因。化学发光技术实际上是无背景的,使得 luc
报告基因成为检测低水平基因表达的理想选择。在标准荧光计数仪中可以可靠地测量到 0.02 pg
的荧光素酶。除了用于基因表达的外,荧光素酶还用于 ATP 的检测。
MCE 的所有产品仅用作科学研究或药证申报,我们不为任何个人用途提供产品和服务
生物活性
体外研究
1. 注意事项
a) D-萤光素盐易溶于水性缓冲液 (pH 6.1-6.5),溶解度最高可达 100 mM。储备液可用不含 ATP 的水配制,并在 -20°C 下避光保存。游离酸必须用适当的碱中和才能溶解。在较高的 pH 值下,荧光素会在碱催化下形成脱氢荧光素,并外消旋化为 L-异构体。
b) D-荧光素可用于任何现有的报告分析或 ATP 分析系统。
c) 如果测试 ATP,请戴上手套并使用不含 ATP 的容器,以尽量减少所有可能的 ATP 污染源。仅使用无菌的无 ATP 水和试剂。使用高压灭菌水制备所有试剂。
2. 实验方案
本方案仅提供一个指导,应根据您的具体需要进行修改。
以下方案是钾和钾的示例钠盐制备。它适用于大多数细胞类型和体内动物使用。
2.1 体外生物发光图像分析的示例方案
a) 在无菌水中制备 100 mM (100-200X) 荧光素原液。拌匀。立即使用,或一次性分装,-20°C保存,避免冻融循环,避免光照。
b) 制备0.5-1 mM D-Luciferin工作液于pre-加热的组织培养基。
c) 从培养的细胞中吸出培养基。
d) 向细胞中加入荧光素工作溶液,并在成像前将细胞在 37°C 下孵育 5-10 分钟。
2.2 体内生物发光图像分析的示例方案
a) 在 DPBS 中制备 15 mg/mL 荧光素原液,不含 Mg2+ 和 Ca2+。混合均匀。
b) 过滤器通过 0.2 μM
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生物活性
体外研究
1. 注意事项
a) D-萤光素盐易溶于水性缓冲液 (pH 6.1-6.5),溶解度最高可达 100 mM。储备液可用不含 ATP 的水配制,并在 -20°C 下避光保存。游离酸必须用适当的碱中和才能溶解。在较高的 pH 值下,荧光素会在碱催化下形成脱氢荧光素,并外消旋化为 L-异构体。
b) D-荧光素可用于任何现有的报告分析或 ATP 分析系统。
c) 如果测试 ATP,请戴上手套并使用不含 ATP 的容器,以尽量减少所有可能的 ATP 污染源。仅使用无菌的无 ATP 水和试剂。使用高压灭菌水制备所有试剂。
2. 实验方案
本方案仅提供一个指导,应根据您的具体需要进行修改。
以下方案是钾和钾的示例钠盐制备。它适用于大多数细胞类型和体内动物使用。
2.1 体外生物发光图像分析的示例方案
a) 在无菌水中制备 100 mM (100-200X) 荧光素原液。拌匀。立即使用,或一次性分装,-20°C保存,避免冻融循环,避免光照。
b) 制备0.5-1 mM D-Luciferin工作液于pre-加热的组织培养基。
c) 从培养的细胞中吸出培养基。
d) 向细胞中加入荧光素工作溶液,并在成像前将细胞在 37°C 下孵育 5-10 分钟。
2.2 体内生物发光图像分析的示例方案
a) 在 DPBS 中制备 15 mg/mL 荧光素原液,不含 Mg2+ 和 Ca2+。混合均匀。
b) 过滤器通过 0.2 μM
