明场显微镜观察到的是白色背景、有色结构的图像。在传统的显微形态观察中,该模式已形成了一系列配套的技术体系,具有结构显示全面、观察条件简便和结果保存性好等优点。在分子原位检测的实验中,反应的显色产物有时可能被背景的杂质干扰,判断显色结果和分子分布的特异性有一定困难。荧光显微术较好地解决了这个问题,基本原理是:用荧光染色剂或荧光基团标记的反应物与标本作用,使待检结构具有特异性荧光发光。荧光显微镜(fluorescence
microscope)观察到的影像背景全黑,目标结构发光。一般标本中发荧光的杂质很少,因此保证了检测的特异性。
荧光(fluorescence)是一种受激辐射发光。当特定波长的光照射到某些原子时,光的能量使核周的部分电子由原来的轨道跃迁到了能量更高的轨道(激发态);但激发态是不稳定的,电子会从激发态恢复到基态,能量以光的形式释放,产生能量低于(波长长于)原激发光的荧光(下图)。生物医学领域最常用的单纯荧光光色有蓝色、绿色和红色,激发它们的色光分别为紫外光、蓝光和绿光。因此,多数荧光显微镜都至少要配置紫外、蓝、绿3种滤光片。
(荧光产生的原理)
观察荧光发光,须采用落射式照明系统(下图示例)。光路与明
荧光(fluorescence)是一种受激辐射发光。当特定波长的光照射到某些原子时,光的能量使核周的部分电子由原来的轨道跃迁到了能量更高的轨道(激发态);但激发态是不稳定的,电子会从激发态恢复到基态,能量以光的形式释放,产生能量低于(波长长于)原激发光的荧光(下图)。生物医学领域最常用的单纯荧光光色有蓝色、绿色和红色,激发它们的色光分别为紫外光、蓝光和绿光。因此,多数荧光显微镜都至少要配置紫外、蓝、绿3种滤光片。
观察荧光发光,须采用落射式照明系统(下图示例)。光路与明
