雷公藤甲素的背景与概述及制备方法!
2023-11-29 14:30阅读:
雷公藤甲素的背景与概述及制备方法!
一、背景及概述
雷公藤甲素(triptolide)是从雷公藤中分离出的活性最高的环氧化二萜内酯化合物,是雷公藤的主要有效成分之一,其相关效价比雷公藤总苷高100-200倍。经药理和临床试验表明,
其具有确切的免疫抑制、抗炎、抗生育及抗肿瘤等生物活性。
二、制备方法
方法一、
雷公藤药材300公斤(经检测,其雷公藤甲素含量为0.0043%),粉碎至20~30目,装入
提取罐,加入3吨乙酸乙酯,再加入360g抗坏血酸,加热回流提取3次,每次5小时,提取
液经过滤、减压浓缩得浸膏8.3公斤;用360升二氯甲烷溶解浸膏,打入萃取罐,另称取17.28
公斤NaOH,配制720升0.6moL/LNaOH溶液,分2次打入萃取罐,对二氯甲烷溶解液进行
碱洗2次,浓缩二氯甲烷相得碱洗后浸膏2公斤;取10公斤200~300目青岛海洋柱层析正相
硅胶,湿法裝直径35cm柱,碱洗后浸膏上样后先用二氯甲烷洗脱,待洗脱液颜色变淡后
用 二氯甲烷:甲醇=50:1混合溶剂洗脱2个柱体积,然后用甲醇洗脱,浓缩甲醇洗脱液得甲
醇洗脱物427g;取20公斤200~300目青岛海洋柱层析正相硅胶,湿法裝直径50cm柱,甲醇
洗脱物上样后依次用石油醚:乙酸乙酯=10:1、6:1、4:1、2:1、1:1(体积比)的混合
溶剂进行梯度洗脱,每个比例洗脱约8个柱体积,收集含雷公藤甲素的洗脱液,浓缩至约1/8
体积后4下静置析晶,得雷公藤甲素粗品13.8g;将粗品用异丙醚作结晶溶剂在室温下进行
重结晶,结晶完毕后过滤得雷公藤甲素纯品12.3g,HPLC检测其纯度为99.4%。
方法二、
1)超声强化提取:取雷公藤茎1.0kg,干燥粉碎后过60目筛,然后取100克粉末
放入2500mL锥形瓶中,按固液比1:10(W/V)加入乙醇/水/1-乙基-3-甲基咪唑溴盐(4:
1:5,V/V/V)的混合物,于超声功率密度50W/cm2,超声频率50kHz,温度45条
件下,超声提取20min,经固液分离得到含雷公藤甲素和雷公藤乙素的提取液。
2)有机溶剂萃取:将石油醚加入到上述步骤1)得到的提取液中,按提取液与石油
醚的体积比5:1萃取3次,分离有机相得雷公藤甲素和雷公藤乙素萃取相,然后将得到
的有机萃取相在50下减压浓缩至近干,得到含有雷公藤甲素和雷公藤乙素的黄色粗
品。萃取余液循环使用,该萃取余液的主要成分为离子液体(1-乙基-3-甲基咪唑溴盐)。
3)HSCCC分离纯化:称取步骤2)得到的雷公藤甲素和雷公藤乙素的黄色粗品500
mg,选择甲基叔丁基醚-正丁醇-乙腈-水-1-烯丙基-3-甲基咪唑溴盐(2:3:3:40.05,
V/V)作为HSCCC溶剂体系,将250mL的HSCCC溶剂体系以及上述雷公藤黄色粗品分
别加入分液漏斗中,震荡使溶液充分混合,放置过夜,分相平衡后分出上相和下相。以
溶剂体系的上相为固定相,下相为流动相,调整转速为750r/min,柱温为30,用高速
逆流色谱仪(上海同田生物技术有限公司生产的TBE-1000A型)以5.0mL/min流速泵入
HSCCC螺旋管,根据检测器的谱图分步收集目标物,分别获得雷公藤甲素和雷公藤乙 素的溶液。
4)真空冷冻干燥:将步骤3)得到的收集液,预冻温度-25,工作压力25Pa,
升华温度50,解析温度65,得到纯度大于95%的雷公藤甲素和雷公藤乙素。
检测采用Agilent
1100series高效液相色谱仪,色谱柱为AccQ.Tag C18柱(150mm×3.9 mm
i.d.,5μm,Waters,Milford,MA,USA),流动相为0.05%(v/v)醋酸-醋酸铵溶液(5
mmol/L)/乙腈/甲醇(60:30:10,V/V/V),流速为0.6mL/min,紫外检测器在220nm波长
下进行检测,雷公藤甲素和雷公藤乙素的纯度均大于95%。