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米根霉的保藏条件与注意事项及打管说明！

2024-06-26 14:14阅读：

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米根霉的保藏条件与注意事项及打管说明！



一、菌种简介
米根霉(Rhizopus oryzae Went et Pr.Geerl.) 是中国药和酒曲中的重要霉菌之一。在土壤、空气及其他物质上亦常见。菌落疏松或稠密，最初白色后变为灰褐至黑褐色，匍匐枝爬行，无色。假根发达，指状或根状分枝。囊托楔形，菌丝形成厚垣孢子，接合孢子未见。发育温度30～35，最适温度37，41亦能生长。能糖化淀粉、转化蔗糖 ，产生乳酸、反丁烯二酸及微量酒精。产L(+)乳酸能力强，达70%左右。

二、产品信息
平台编号：Bio-52589
规格：冻干物
拉丁属名：Rhizopus Oryzae Went Et Prinsen-Geerligs
菌株名称：米根霉
其他编号：
M101
培养基编号：14
培养温度：25-28
培养时间：5-7 天
用途：做甜酒。
注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

三、培养基
综合马铃薯培养基（PDA）
20%马铃薯汁 1L 葡萄糖 20g MgSO4.7H2O 1.5g KH2PO4 3g
Vitanib B1 (硫胺素) Trace 微量约 8mg Agar (琼脂) 20g pH 自然
20%马铃薯汁配制方法：马铃薯洗净去皮，取 200 克切成小块 , 加水 1000 毫升煮沸 20 分钟后滤去马铃薯块，将滤液补足 1000ml。

四、保藏条件
安瓿瓶冻干菌种和培养物应在 2-8°C 保存。西林瓶菌种请置于-20冷冻。甘油保藏温度为-80°C;请勿长期置于室温。

五、注意事项
1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板或者斜面，若接种液体培养基，则试管液体不超过 5ml 为宜）；
2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；
3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；
4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；
5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；
6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降或不活，请在收到后 2 个月内和微生物菌种查询网联系，逾期不予受理；
7） 打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。
8）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。
9）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。

六、打管说明书
1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒，将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热；立即滴 2-3 滴无菌水于加热部位，使管壁破裂；再用镊子或其他适宜工具敲下破裂处。
2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，可将残留在吸管中 1-2 滴菌悬液转接至固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。以液体培养结果为准。
3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 2-8的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，需要转接至 2-3 代恢复活力。
4、复苏后的菌种在传 1-2 代后使用。
5、暂不启开的安瓿管应于 4中保藏（特殊除外）。
6、冻干管打开后需一次用完，不能留存。
7、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。
8、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。
9、如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到后 2 个月内联系，逾期不予受理。

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