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改良马丁琼脂培养基的pH值调节方法及具体操作步骤！

2025-12-23 15:05阅读：

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改良马丁琼脂培养基的pH值调节方法及具体操作步骤！



改良马丁琼脂培养基的pH值调节是保证其选择性（抑制细菌、促进真菌生长）的关键步骤，需在培养基成分完全溶解后、灭菌前进行，具体方法如下：

一、调节前准备

1、试剂准备

酸碱调节剂：1mol/L 盐酸溶液（HCl）和 1mol/L 氢氧化钠溶液（NaOH），用于降低或升高 pH 值。

配制方法（以 1000mL 为例）：

1mol/L HCl：量取 82mL 浓盐酸（密度 1.19g/mL，质量分数 37%），缓慢加入适量纯化水，搅拌均匀后定容至 1000mL。

1mol/L NaOH：称取 40g 氢氧化钠固体，加入适量纯化水溶解（注意放热，可冷水浴降温），冷却后定容至 1000mL。

校准工具：经校准的 pH 计（精度 ±0.02）或精密 pH 试纸（范围 3.8~5.4，因目标 pH 为 4.0~6.0，此范围更精准）。

辅助工具：移液管（1mL、5mL）或胶头滴管，玻璃棒，烧杯（用于分装少量培养基供检测）。

2、培养基状态

确保培养基中所有成分（尤其是琼脂）已完全溶解，且溶液处于温热状态（避免琼脂凝固，影响搅拌均匀性），此时溶液为澄清或轻微浑浊的液体。

二、具体调节步骤

1、初步测定 pH 值

用移液管取 5~10mL 待调节的培养基溶液，转移至洁净小烧杯中（避免污染原溶液）。

若用 pH 计：将电极插入溶液中，轻轻搅拌（避免电极碰撞烧杯壁），待读数稳定后记录初始 pH 值。

若用精密 pH 试纸：取一条试纸，蘸取少量培养基溶液，30 秒内与标准比色卡对比，读取初始 pH 值。

2、分步调节 pH 值

根据初始 pH 值与目标值（4.0~6.0）的差异，选择盐酸或氢氧化钠溶液进行调节：

若初始 pH > 6.0（偏碱）：用胶头滴管或移液管向培养基中逐滴加入 1mol/L HCl，每加入 1~2 滴后，用玻璃棒充分搅拌均匀（整个培养基溶液，而非仅小烧杯中的样品），再次取样测定 pH，重复操作直至 pH 降至 4.0~6.0 范围内。

若初始 pH < 4.0（偏酸）：用同样方法逐滴加入 1mol/L NaOH，搅拌后复测，直至 pH 升至目标范围。

注意事项：

调节时需“少量多次”，避免一次性加入过多酸碱导致 pH 值剧烈波动（如超过目标范围后需反向调节，可能影响培养基成分稳定性）。

搅拌需充分，确保酸碱均匀分散在培养基中，否则局部浓度过高可能导致测定误差。

3、最终确认 pH 值

当 pH 值稳定在 4.0~6.0 范围内后，再次取样复测 1~2 次，确认读数一致（pH 计需冲洗电极后再测，避免残留影响），确保调节准确。

三、调节后处理

pH 值调节完成后，需立即进行分装和灭菌（121、20 分钟），避免长时间放置导致杂菌污染。灭菌后，培养基的 pH 值可能会有轻微变化（通常 ±0.2 范围内），属于正常现象，不影响使用。

通过以上步骤，可精准调节改良马丁琼脂培养基的 pH 值，为真菌的选择性培养提供适宜环境。

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