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洋葱伯克霍尔氏菌鉴定培养基的检验原理和详细使用方法！

2026-02-25 14:56阅读：

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洋葱伯克霍尔氏菌鉴定培养基的检验原理和详细使用方法！



洋葱伯克霍尔氏菌鉴定培养基的核心检验原理是利用该菌独特的生化特性（如对特定碳源的利用能力、无荧光产生等）与其他细菌形成差异，从而实现分离和鉴定；使用方法需严格遵循“培养基制备→接种→培养→观察结果”的流程，确保结果准确。

一、核心检验原理

洋葱伯克霍尔氏菌（Burkholderia cepacia，简称 Bcc）的鉴定培养基，其原理主要基于 3 个关键特性设计，通过“选择性抑制 + 生化鉴别”双重作用实现鉴定：

选择性抑制杂菌培养基中添加了头孢他啶和多粘菌素 B等抗生素，能有效抑制大多数革兰氏阳性菌、其他常见革兰氏阴性菌（如大肠埃希菌、铜绿假单胞菌
）的生长，仅允许 Bcc 等少数耐药菌存活，减少杂菌干扰。

碳源利用差异鉴别培养基以蔗糖为主要碳源，Bcc 能高效分解蔗糖产酸，使培养基中的 pH 指示剂（如溴甲酚紫）颜色由紫色变为黄色；而其他可能存活的杂菌（如洋葱假单胞菌）通常无法分解蔗糖，菌落周围仍保持紫色。

荧光排除法辅助部分与 Bcc 形态相似的细菌（如铜绿假单胞菌）在紫外灯（365nm）下会产生绿色荧光，而 Bcc 无荧光特性。培养后结合紫外灯观察，可进一步排除干扰菌，提高鉴定准确性。

二、详细使用方法

使用流程需严格控制无菌操作和培养条件，避免污染或结果误判，具体步骤如下：

1、培养基制备（以干粉培养基为例）

称量与溶解：按培养基说明书比例（如 BCSA 培养基通常为 40g/L），称取干粉于纯化水中，搅拌至完全溶解（可轻微加热助溶，但避免过度煮沸）。

灭菌：将溶解后的培养基分装至锥形瓶或培养皿（未倒板时），置于121高压蒸汽灭菌 15 分钟，灭菌后取出冷却至 45-50（手触瓶壁不烫手为宜）。

倒板：在无菌操作台内，将冷却后的培养基均匀倒入无菌培养皿（每皿约 15-20mL），待其自然凝固（约 30 分钟，避免震动），凝固后标记名称和日期，备用（可 4冷藏保存，有效期不超过 1 周）。

2、样品接种

无菌操作准备：接种前消毒操作台，点燃酒精灯，准备好接种环、样品（如临床标本、环境水样）。

接种方式：

若为液体样品（如水样）：取 0.1-0.2mL 样品，用无菌涂布棒均匀涂布在培养基表面。

若为固体样品（如土壤、食品）：先将样品制成匀浆（用无菌生理盐水稀释），再取上清液涂布。

若为纯菌分离：用接种环取少量菌液，在培养基表面进行“划线分离”（确保单菌落生长，便于观察形态）。

3、培养条件控制

将接种后的培养皿倒置（避免冷凝水滴落污染菌落），放入35-37恒温培养箱，培养48-72 小时（Bcc 生长速度较慢，需足够时间形成典型菌落，避免提前观察导致漏判）。

4、结果观察与判断

培养结束后，结合“菌落形态 + 颜色变化 + 荧光特性”综合判断，典型阳性结果如下：

观察项目 洋葱伯克霍尔氏菌阳性特征 阴性/杂菌特征

菌落形态 圆形、边缘整齐、表面光滑湿润、直径 1-2mm 形态不规则、边缘粗糙或黏液状

培养基颜色 菌落周围培养基由紫变黄色 无颜色变化，仍为紫色

紫外灯（365nm） 无荧光 可能产生绿色或其他颜色荧光（如铜绿假单胞菌）

结果判定：同时满足“菌落形态典型 + 培养基变黄 + 无荧光”，可初步判定为 Bcc 阳性；若不符合任一特征，则为阴性，需进一步用生化鉴定管或分子生物学方法确认。

三、注意事项

无菌操作关键：全程需在无菌环境下进行（如无菌操作台），接种环、涂布棒需灼烧灭菌（冷却后再使用，避免烫死细菌），防止环境杂菌污染。

抗生素稳定性：部分培养基中的抗生素对高温敏感，若为“灭菌后添加”型培养基，需待培养基灭菌后冷却至 45-50再加入抗生素，混匀后倒板，避免高温破坏抗生素活性。

培养时间不可缩短：Bcc 生长速度慢于常见菌（如大肠埃希菌），若培养时间不足 24 小时，可能仅形成微小菌落，无法观察到颜色变化，导致假阴性。

结果复核：初步鉴定阳性后，建议通过生化反应管（如氧化酶试验阳性、赖氨酸脱羧酶阴性）或质谱鉴定仪进一步确认，避免因相似菌导致误判。

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