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大鼠原代腹腔主动脉平滑肌细胞的分离培养与鉴定方法！

2026-03-13 14:45阅读：

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大鼠原代腹腔主动脉平滑肌细胞的分离培养与鉴定方法！





大鼠原代腹腔主动脉平滑肌细胞（Rat Primary Abdominal Aortic Smooth Muscle Cells, rPAASMC）是从大鼠腹腔主动脉血管壁中层分离培养的原代细胞，是研究血管生理、病理及药物筛选的经典体外模型。

一、基本特性

组织来源：大鼠腹腔主动脉中膜层（平滑肌层）

生长特性：贴壁生长，呈典型“峰 - 谷”状排列

形态特征：

原代早期：梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形居中

汇合后：长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，平行排列或呈旋涡状/栅栏状

培养条件：

基础培养基：DMEM（高糖）
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血清：20% 胎牛血清（FBS）

抗生素：1% 青链霉素（双抗）

环境：37、5% CO、饱和湿度

传代：0.25% 胰蛋白酶消化，1:2 传代，3 代以内状态最佳

冻存：90% FBS + 10% DMSO，-80短期保存，液氮长期保存

二、分离培养方法（贴块法，最常用）

1、实验准备

动物：8-10 周龄雄性 SD 大鼠（体重 200-250g）

试剂：预冷 PBS、DMEM 完全培养基、75% 酒精、0.25% 胰蛋白酶

器械：超净台、眼科剪、眼科镊、培养瓶、离心管

2、操作步骤

处死与消毒：颈椎脱臼处死大鼠，75% 酒精浸泡 3-5 分钟全身消毒

取材：无菌开腹，分离腹腔主动脉（自膈肌至髂动脉分叉处），迅速置于预冷 PBS 中清洗血污

去除外膜与内膜：

用眼科镊仔细剥离血管外膜的脂肪与结缔组织

沿血管纵轴剪开，内膜面朝上，用弯头镊轻刮内膜 1-2 次，彻底去除内皮细胞

分离中膜：小心分离并剪下血管中膜（平滑肌层），置于含完全培养基的培养皿中

剪碎组织块：将中膜剪成约 1mm³ 的小块

组织块贴壁培养：

将组织块均匀铺于培养瓶底，间距 0.5cm 左右

翻转培养瓶，加入少量培养基，37静置 1 小时使组织块贴壁

缓慢翻转培养瓶，补足培养基，置于培养箱培养

换液与观察：3 天后首次换液，之后每 3 天换液一次；5-7 天可见细胞从组织块边缘爬出

传代：细胞融合达 80%-90% 时，胰酶消化传代

三、细胞鉴定（纯度验证）

金标准：α- 平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫荧光染色

阳性结果：胞浆呈现特异性绿色荧光，纯度应 > 90%

辅助鉴定：

形态学：典型长梭形、峰谷状排列

功能学：血管收缩剂可诱导细胞收缩

四、主要应用领域

血管生理研究：血管张力调节、收缩/舒张机制、离子通道功能

心血管疾病模型：

动脉粥样硬化：研究脂质沉积、炎症反应、泡沫细胞形成

高血压：血管重构、平滑肌细胞增殖与迁移机制

主动脉瘤/夹层：细胞外基质降解、细胞凋亡

药物研发：

抗动脉粥样硬化药物筛选

降压药、血管扩张剂药效评价

药物毒性与安全性评估

基础机制研究：细胞信号通路、基因表达调控、表型转换（收缩型→合成型）

五、注意事项

无菌操作：全程严格无菌，避免细菌、真菌及支原体污染

取材速度：动物处死后尽快取材，减少组织缺血时间

内膜去除：彻底刮除内膜是获得高纯度平滑肌细胞的关键

细胞状态：原代细胞有限传代（通常 < 5 代），建议使用 P3 以内细胞进行实验

血清质量：高比例优质 FBS 对原代细胞存活与生长至关重要

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