兔血管外膜成纤维细胞的功能与培养方法及注意事项！
2026-05-12 15:00阅读：
兔血管外膜成纤维细胞的功能与培养方法及注意事项！
兔血管外膜成纤维细胞（Rabbit Vascular Adventitial Fibroblasts,
VAFs）是源自兔血管外膜的原代贴壁细胞，核心功能为合成细胞外基质、参与血管修复与重塑，是血管生理与病理研究的常用模型。
一、细胞基本特征
组织来源：健康兔（2-3kg）的主动脉、肺动脉等血管外膜（最外层疏松结缔组织）。
形态：
刚分离：圆形、折光性强，悬浮生长。
贴壁后（6h）：梭形/长纺锤形，胞核清晰、卵圆形，散在生长。
融合时：交织成网状，呈星形扁平状。
生长特性：贴壁依赖；体外可传3-5 代，3 代内活性最佳；倍增时间约
24-48h；2-3 天换液。
鉴定标志物：波形蛋白（Vimentin）阳性，α-SMA 阴性（排除平滑肌细胞污染），纯度＞90%。
二、核心生理功能
基质合成：分泌 I/III
型胶原、弹性蛋白、纤连蛋白，维持血管壁结构与弹性。
损伤修复：血管损伤时迁移、增殖，重塑外膜，参与炎症反应。
旁分泌调控：释放细胞因子与血管活性物质，影响内皮和平滑肌细胞功能。
表型转化：特定条件下可向肌成纤维细胞分化，参与病理性重塑。
三、培养体系（原代/复苏）
基础培养基：DMEM/F12（1:1），含 10% 胎牛血清、1%
双抗、1% 谷氨酰胺。
培养环境：37、5%
CO、饱和湿度（70%-80%）。
1、原代分离（组织块/酶消化法）：
无菌取血管，预冷 PBS
冲洗，显微镜下剥离外膜。
剪碎至 1mm³，0.1% 胶原酶 37消化
30-60min。
终止消化、过滤、离心，接种培养瓶，24h
后换液去除未贴壁细胞。
2、传代（1:2 比例）：
80%-90% 汇合时，PBS 洗 1-2 次。
0.25% 胰酶消化 1-2min，镜检细胞回缩即终止。
离心（1000rpm×4min），重悬分瓶。
3、冻存与复苏：
冻存液：90% FBS+10%
DMSO，梯度降温后液氮保存。
复苏：37快速融化，离心去
DMSO，接种换液。
四、应用场景
血管疾病机制：研究动脉粥样硬化、血管再狭窄、肺动脉高压的细胞与分子机制。
药物筛选：评估抗纤维化、抗炎、促修复药物的药效与毒性。
组织工程：作为种子细胞构建血管移植物、血管外膜修复材料。
创伤修复：探索皮肤/血管创面愈合的调控机制与生物材料研发。
五、注意事项
纯度控制：严格剥离外膜，避免中层平滑肌细胞污染；每批细胞需做波形蛋白鉴定。
代次限制：优先使用3
代内细胞，避免老化导致增殖与功能下降。
无菌操作：取材与培养全程无菌，防止支原体/细菌污染。
北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！
