但是反过来却是不成立的，即：这个比值不能用来指示核酸被蛋白污染的程度。因为核酸在260nm和280nm处的消光系数比蛋白质高很多，即使有明显的蛋白污染也不会大幅度改变核酸溶液的OD260：OD280比值。例如，纯的核酸的OD260：OD280比值是2.0，当掺入了5%的蛋白质污染之后，OD260：OD280比值变成1.99，掺入20%的蛋白质污染后，也才变成1.96。这就说明这个比值用来指示核酸被蛋白污染的程度是非常不灵敏的。
蛋白质／％
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新浪博客
但是反过来却是不成立的，即：这个比值不能用来指示核酸被蛋白污染的程度。因为核酸在260nm和280nm处的消光系数比蛋白质高很多，即使有明显的蛋白污染也不会大幅度改变核酸溶液的OD260：OD280比值。例如，纯的核酸的OD260：OD280比值是2.0，当掺入了5%的蛋白质污染之后，OD260：OD280比值变成1.99，掺入20%的蛋白质污染后，也才变成1.96。这就说明这个比值用来指示核酸被蛋白污染的程度是非常不灵敏的。
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A280(nm)紫外光吸收法测定蛋白浓度
原理：
蛋白质分子中常含有酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸等苯环结构，在紫外280nm波长处有最大吸收峰，其光吸收值与蛋白质浓度成正比，故可以用280nm波长吸收值大小来测定蛋白质含量。
优点：
1. 快速；2. 对蛋白质无破坏性。
缺点：
1. 不是严格的定量方法。因为此法是根据酪氨酸（Tyr）、苯丙氨酸（Phe）、色氨酸（Trp）残基的强吸收值来测定的，不同的蛋白质具有不同的消光系数。另外，当蛋白质分子中不含Tyr、Phe或Trp残基时，该方法就不能检出蛋白。（此法用于测粗提总蛋白浓度较为适宜）
2. 核酸可引起强烈干扰。
灵敏度：
0.2 mg/ml ~ 2 mg/ml；比色杯最小测量体积为0.1 ml。
注意事项：
实验室通常认为用1cm的比色杯所测光吸收值为1.0时，蛋白浓度约为1mg/ml，这是非常不精确的。如果实验所用的缓冲液和水有较高的光吸收值，说明缓冲液中有干扰物质存在。
测量方法和计算公式：
对于不含核酸污染的蛋白溶液（如果样品光吸收值大于2.0，应将样品稀释至光吸收值小于2.0）：选择蛋白缓冲液作为空白对照，测定280 nm波长处的光吸收值，一般来说，1 A280 Unit ≈ 1mg/ml
对于存在核酸污染的蛋白溶液：选择蛋白缓冲液作为空白对照，测定280 nm和260 nm波长处的光吸收值，或280 nm和205 nm波长处光吸收值，按照以下公式计算：
蛋白浓度（mg/ml）= [1.55 × A280] － [0.76 × A260]
蛋白浓度（mg/ml）= A205 ÷ (27 ＋A280/A205)
__________________________________________________________________________________________
A260(nm)光吸收测DNA浓度
利用260nm光吸收测定DNA浓度计算公式:
1 A260 Unit of dsDNA = 50 μg/ml H2O
1 A260 Unit of ssDNA = 33 μg/ml H2O
注意：
A260的光吸收值应当落在0.1到1.0之间。因此需根据不同情况按适当比例稀释。
A260/A280≥1.8代表DNA纯度可以；如果小于1.8，表示有蛋白污染；如果大于2.0则表示可能有RNA污染。
A260光吸收值不能体现DNA链的长短。
___________________________________________________________________________________________
1 A260 unit of ds DNA =50ug/ml
1 A260 unit of ssDNA =33ug/ml
纯的DNA A260/A280>=1.8
如果小于1.8说明污染了蛋白或有机溶剂
DNA A260/A280>2说明有RNA污染，
OD对于DNA的长度无关
——罗氏手册
--------------------------------------------
试剂与仪器：
操作步骤：
1) 分光光度计先用水在260nm和280nm两个波长下校零。
2) 取质粒DNA样品2μl，用水稀释100倍，转入分光光度计的石英比色杯中。
3) 在260nm和280nm分别读出样品光密度值。如果样品浓度单位为μg/μl，则样品DNA浓度为OD 值的10倍，即如 OD<SUB>260</SUB>=0.1，则样品浓度即为1μg/μl。
4) 若OD<SUB>260</SUB>/OD<SUB>280</SUB>大于1.8，说明仍有RNA，可以考虑用RNA酶处理样品，若小于1.8，说明样品中含有蛋白质或酚，应再用酚/氯仿抽提，以乙醇沉淀纯化DNA。
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A280(nm)紫外光吸收法测定蛋白浓度
原理：
蛋白质分子中常含有酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸等苯环结构，在紫外280nm波长处有最大吸收峰，其光吸收值与蛋白质浓度成正比，故可以用280nm波长吸收值大小来测定蛋白质含量。
优点：
1. 快速；2. 对蛋白质无破坏性。
缺点：
1. 不是严格的定量方法。因为此法是根据酪氨酸（Tyr）、苯丙氨酸（Phe）、色氨酸（Trp）残基的强吸收值来测定的，不同的蛋白质具有不同的消光系数。另外，当蛋白质分子中不含Tyr、Phe或Trp残基时，该方法就不能检出蛋白。（此法用于测粗提总蛋白浓度较为适宜）
2. 核酸可引起强烈干扰。
灵敏度：
0.2 mg/ml ~ 2 mg/ml；比色杯最小测量体积为0.1 ml。
注意事项：
实验室通常认为用1cm的比色杯所测光吸收值为1.0时，蛋白浓度约为1mg/ml，这是非常不精确的。如果实验所用的缓冲液和水有较高的光吸收值，说明缓冲液中有干扰物质存在。
测量方法和计算公式：
对于不含核酸污染的蛋白溶液（如果样品光吸收值大于2.0，应将样品稀释至光吸收值小于2.0）：选择蛋白缓冲液作为空白对照，测定280 nm波长处的光吸收值，一般来说，1 A280 Unit ≈ 1mg/ml
对于存在核酸污染的蛋白溶液：选择蛋白缓冲液作为空白对照，测定280 nm和260 nm波长处的光吸收值，或280 nm和205 nm波长处光吸收值，按照以下公式计算：
蛋白浓度（mg/ml）= [1.55 × A280] － [0.76 × A260]
蛋白浓度（mg/ml）= A205 ÷ (27 ＋A280/A205)
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A260(nm)光吸收测DNA浓度
利用260nm光吸收测定DNA浓度计算公式:
1 A260 Unit of dsDNA = 50 μg/ml H2O
1 A260 Unit of ssDNA = 33 μg/ml H2O
注意：
A260的光吸收值应当落在0.1到1.0之间。因此需根据不同情况按适当比例稀释。
A260/A280≥1.8代表DNA纯度可以；如果小于1.8，表示有蛋白污染；如果大于2.0则表示可能有RNA污染。
A260光吸收值不能体现DNA链的长短。
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1 A260 unit of ds DNA =50ug/ml
1 A260 unit of ssDNA =33ug/ml
纯的DNA A260/A280>=1.8
如果小于1.8说明污染了蛋白或有机溶剂
DNA A260/A280>2说明有RNA污染，
OD对于DNA的长度无关
——罗氏手册
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试剂与仪器：
操作步骤：
1) 分光光度计先用水在260nm和280nm两个波长下校零。
2) 取质粒DNA样品2μl，用水稀释100倍，转入分光光度计的石英比色杯中。
3) 在260nm和280nm分别读出样品光密度值。如果样品浓度单位为μg/μl，则样品DNA浓度为OD 值的10倍，即如 OD<SUB>260</SUB>=0.1，则样品浓度即为1μg/μl。
4) 若OD<SUB>260</SUB>/OD<SUB>280</SUB>大于1.8，说明仍有RNA，可以考虑用RNA酶处理样品，若小于1.8，说明样品中含有蛋白质或酚，应再用酚/氯仿抽提，以乙醇沉淀纯化DNA。