HiPerFect转染试剂的使用

2018-12-21 16:00阅读：

http://blog.sina.cn/dpool/blog/u/1575035940

在做miRNA的相关实验中，在验证靶基因方面，通常是向靶细胞转染miRNA mimics，或者是构建稳定过表达的miRNA的细胞株，然后做WB即可。我的靶细胞是RAW264.7，但向这种细胞株转染miRNA mimics时，使用lipo2000或lipo3000的效率没那么高，不太容易做出结果（文献中有人使用的，效果很好，但我实验中总是做不出来）。后来在QIAGEN官网上搜到了一个转染试剂，HiPerFect，看介绍这个转染试剂是专门用于转染miRNA的。以下是实验流程，具体实验我还没做，只是翻译了说明书中的内容。
1. 将2.5x10e5个RAW264.7细胞铺在6孔板中，培养基体积为2.3mL，含FBS与双抗。
2. 转染时，将150ng的miRNA稀释到100uL的不含血清的培养基中（通常使用OPTI-MEN培养基），如果是miRNA inhibitor，剂量增加10倍，使miRNA的终浓度为5nM，这个浓度根据实验而定，文献中使用lipo2000或3000转染miRNA mimcs时的终浓度

是20nM-100nM，但QIAGEN的说明书中提到，这个转染试剂的优点在于能在低浓度水平上进行miRNA的转染。加入12uL的HiPerFect到OPTI-MEM中，混匀。说明书中还提到，在正式实验前，最好根据自己实验室的条件与靶细胞，优化一下剂量。miRNA mimics的储备浓度通常是20uM，如果要使终浓度为100nM，那么就要加10uL的储备液。
3. 在常温下孵育5到10minj。
4. 将上述的转染复合物逐滴加到6孔板中，轻轻混匀。
5. 将细胞培养板放到孵箱中，在24到72小时后检测基因表达量（我觉得等细胞长到80%密度的时候就行），如果细胞数目过少，中间记得更换新培养基。
以下是说明书中提供的参考数据（6孔板的一个孔）：

HiPerFect转染试剂的使用

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