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质粒的保存以及使用

2016-04-07 23:04阅读:
1、如果得到的是质粒DNA,常见的形式是:冻干粉以及液体质粒。冻干粉质粒看看标签比较的量,根据自己的实际需要添加一定量的灭菌水稀释后低俗离心重悬。液体的质粒可以测量一下质粒的实际浓度。根据浓度吸取一定量的质粒转化大肠杆菌菌株,从转化子中提取质粒DNA,并进行酶切鉴定和琼脂糖电泳甚至是直接测序。根据质粒的图谱,观察判断条带的大小与预期中是否相符。此点需要注意冻干粉的质粒稀释后要进行电泳检测,查看质粒是否降解,如果降解可以转化,但是做酶切效果就不明显了。
2、如果质粒保存在细菌菌株中,通常以真空密闭的冻干粉或涂在无菌滤纸片上来邮寄。将上述菌种取少量,转移到3mL含有合适抗生素的液体培养基中,然后在合适温度下振荡12-18小时左右。待液体培养物长好后,在含合适抗生素和适当的必要添加物的琼脂糖培养皿中划线培养,于合适的温度保温过夜。检查皿中所有的克隆,确定其在外形和气味上是否与大肠杆菌相同(酸臭味,酵母土腥味或酒香味,致病菌不要闻!外形规则的圆形,半透明或微透明)。然后将分离的克隆进行小规模液体培养,提取质粒,用不同的限制酶酶切质粒,并用琼脂糖凝胶电泳检测。根据质粒图谱,比较所观察到的条带的大小与预期中是否相符。
3、大肠杆菌制备的甘油菌必须保存在-80˚C冰箱中,菌种中必须含有15%以上(15%-20%)的甘油。
4、制备的穿刺菌株可在4°保存一个月,拿到的穿刺菌可以看到明显的穿刺线,挑取穿刺线上的菌接种到相应的培养基中37°过夜培养即可。

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