2 标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0ml、0.3ml、0.6 ml、0.9 ml、1.2 ml、1.5 ml分别置试管中，各精密加入水至3ml，摇匀，分别精密加入定磷试剂(2.5%钼酸铵溶液:3mol/L硫酸溶液:水:10%抗坏血酸=1:1:2:1，临用前配制)3ml，摇匀，在45
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2 标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0ml、0.3ml、0.6 ml、0.9 ml、1.2 ml、1.5 ml分别置试管中，各精密加入水至3ml，摇匀，分别精密加入定磷试剂(2.5%钼酸铵溶液:3mol/L硫酸溶液:水:10%抗坏血酸=1:1:2:1，临用前配制)3ml，摇匀，在45
℃水浴中反应25分钟。以0号管作为空白对照，照分光光度法(中国药典2005年版二部附录ⅣA)，在660nm波长处测定吸光度(A)，以吸光度(A)为横坐标，含磷量(μg)为纵坐标，绘制标准曲线。
3.总磷量
取样品约0.15g，精密称定，置硝化管中，加混合酸(高氯酸:硝酸=3:2)4ml，硝化管上插入一漏斗，先小火加热至样品炭化，后改为中火硝化至出现大量白色烟雾，待烟雾由浓变稀薄，硝化液澄清透明时，停止加热，放冷，将内容物转移至50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，同法硝化制得空白对照，精密量取上述溶液各2ml，照标准曲线项下的方法，自“各精密加水至3ml，摇匀…… ”起，依法操作，测定吸光度，在标准曲线上求得磷的μg数，计算总磷含量。
4.无机磷
取总磷项下的细粉约0.4g，精密称定，置50ml量瓶中，加热水适量，超声30分钟，用水稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液5ml，置离心管中，精密加沉淀剂(取钼酸铵1g，加水385ml，高氯酸14ml使溶解)5ml，振摇数分钟,充分混匀后离心(3000转/分)15分钟，精密量取上清液2ml，照标准曲线项下的方法，自“各精密加水至3ml，摇匀……”起，依法操作，测定吸光度，在标准曲线上求得磷的μg数。精密量取水5ml ，同法作空白对照。计算无机磷含量。
5. 有机磷含量
有机磷含量=总磷含量-无机磷含量
6.回收率实验
3.5.1 考察样品硝化过程磷量是否有损失。取6份已知量磷标准溶液，依样品硝化过程操作并测定硝化后的磷含量，平均回收率为100.1%，说明硝化过程无磷损失。
3.5.2 考察样品中有机磷硝化是否完全。用与核苷酸结构类似的胞磷胆碱钠对照品为研究对象，定量称取6份胞磷胆碱钠对照品(则磷含量亦为已知)，依样品硝化过程操作并测定硝化后的磷含量，平均回收率为100.0%，说明依本文硝化条件，可以使样品中有机磷硝化完全。
3.5.3 考察无机磷测定的回收率。取6份已知量磷标准溶液，依无机磷测定方法操作，平均回收率为100.5%，回收率良好。
3.5.4 考察小分子物质对无机磷测定是否有干扰。选用环磷腺苷对照品(C10H12N5O6P M=329.2)，定量稀释至相应浓度，照无机磷方法测定，结果吸光度很小，证明未被沉淀剂沉淀的核苷酸小分子物质对无机磷的测定无干扰。
3.6 样品测定结果
表1 样品中总磷、无机磷和有机磷测定结果(μg / Tablet)
4 结果与讨论
4.1 配制沉淀剂和定磷试剂时应注意，钼酸铵的溶解性不好，注意观察其是否溶解完全，沉淀剂超声即可，定磷试剂要保证钼酸铵完全溶解后再加入抗坏血酸溶液。
4.2 显色时间的考察。取一定量的磷标准溶液，按实验方法，从加入定磷试剂后开始记时，从5min-120min，每隔5min测定一次溶液的吸光度。结果表明，25min吸光度达最大且恒定。
4.3 总磷的测定关键步骤在于硝化[4]。硝化时应注意：硝化管上应扣一漏斗形成回流，防止磷流失及硝化液蒸干;样品细粉避免加在管壁上，加硝化液时，尽量全部浸润。先用小火加热，避免底部及侧壁样品过快炭化，待无固体细粉可见时，调至中火加热至沸，后会有大量团状白色烟雾出现，待其变得逐渐稀薄，硝化液呈微黄色冷却后无色时，为硝化完全，关闭加热装置，静置至冷却;硝化后，是否挥酸。用磷标准溶液分别测回收率，挥酸的平均回收率为93.8%，不挥酸100.5%。故硝化后冷却直接转移，不需挥酸。
线性实验
1 对照品溶液的配制：取经105℃干燥至恒重的磷酸二氢钾0.4407g，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液1ml置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液(每1ml含磷10.05μg)。
2 标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0ml、0.3ml、0.6 ml、0.9 ml、1.2 ml、1.5 ml分别置试管中，各精密加入水至3ml，摇匀，分别精密加入定磷试剂(2.5%钼酸铵溶液:3mol/L硫酸溶液:水:10%抗坏血酸=1:1:2:1，临用前配制)3ml，摇匀，在45℃水浴中反应25分钟。以0号管作为空白对照，照分光光度法(中国药典2005年版二部附录ⅣA)，在660nm波长处测定吸光度(A)，以吸光度(A)为横坐标，含磷量(μg)为纵坐标，绘制标准曲线。
3.总磷量
取样品约0.15g，精密称定，置硝化管中，加混合酸(高氯酸:硝酸=3:2)4ml，硝化管上插入一漏斗，先小火加热至样品炭化，后改为中火硝化至出现大量白色烟雾，待烟雾由浓变稀薄，硝化液澄清透明时，停止加热，放冷，将内容物转移至50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，同法硝化制得空白对照，精密量取上述溶液各2ml，照标准曲线项下的方法，自“各精密加水至3ml，摇匀…… ”起，依法操作，测定吸光度，在标准曲线上求得磷的μg数，计算总磷含量。
4.无机磷
取总磷项下的细粉约0.4g，精密称定，置50ml量瓶中，加热水适量，超声30分钟，用水稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液5ml，置离心管中，精密加沉淀剂(取钼酸铵1g，加水385ml，高氯酸14ml使溶解)5ml，振摇数分钟,充分混匀后离心(3000转/分)15分钟，精密量取上清液2ml，照标准曲线项下的方法，自“各精密加水至3ml，摇匀……”起，依法操作，测定吸光度，在标准曲线上求得磷的μg数。精密量取水5ml ，同法作空白对照。计算无机磷含量。
5. 有机磷含量
有机磷含量=总磷含量-无机磷含量
6.回收率实验
3.5.1 考察样品硝化过程磷量是否有损失。取6份已知量磷标准溶液，依样品硝化过程操作并测定硝化后的磷含量，平均回收率为100.1%，说明硝化过程无磷损失。
3.5.2 考察样品中有机磷硝化是否完全。用与核苷酸结构类似的胞磷胆碱钠对照品为研究对象，定量称取6份胞磷胆碱钠对照品(则磷含量亦为已知)，依样品硝化过程操作并测定硝化后的磷含量，平均回收率为100.0%，说明依本文硝化条件，可以使样品中有机磷硝化完全。
3.5.3 考察无机磷测定的回收率。取6份已知量磷标准溶液，依无机磷测定方法操作，平均回收率为100.5%，回收率良好。
3.5.4 考察小分子物质对无机磷测定是否有干扰。选用环磷腺苷对照品(C10H12N5O6P M=329.2)，定量稀释至相应浓度，照无机磷方法测定，结果吸光度很小，证明未被沉淀剂沉淀的核苷酸小分子物质对无机磷的测定无干扰。
3.6 样品测定结果
表1 样品中总磷、无机磷和有机磷测定结果(μg / Tablet)
4 结果与讨论
4.1 配制沉淀剂和定磷试剂时应注意，钼酸铵的溶解性不好，注意观察其是否溶解完全，沉淀剂超声即可，定磷试剂要保证钼酸铵完全溶解后再加入抗坏血酸溶液。
4.2 显色时间的考察。取一定量的磷标准溶液，按实验方法，从加入定磷试剂后开始记时，从5min-120min，每隔5min测定一次溶液的吸光度。结果表明，25min吸光度达最大且恒定。
4.3 总磷的测定关键步骤在于硝化[4]。硝化时应注意：硝化管上应扣一漏斗形成回流，防止磷流失及硝化液蒸干;样品细粉避免加在管壁上，加硝化液时，尽量全部浸润。先用小火加热，避免底部及侧壁样品过快炭化，待无固体细粉可见时，调至中火加热至沸，后会有大量团状白色烟雾出现，待其变得逐渐稀薄，硝化液呈微黄色冷却后无色时，为硝化完全，关闭加热装置，静置至冷却;硝化后，是否挥酸。用磷标准溶液分别测回收率，挥酸的平均回收率为93.8%，不挥酸100.5%。故硝化后冷却直接转移，不需挥酸。
3.总磷量
取样品约0.15g，精密称定，置硝化管中，加混合酸(高氯酸:硝酸=3:2)4ml，硝化管上插入一漏斗，先小火加热至样品炭化，后改为中火硝化至出现大量白色烟雾，待烟雾由浓变稀薄，硝化液澄清透明时，停止加热，放冷，将内容物转移至50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，同法硝化制得空白对照，精密量取上述溶液各2ml，照标准曲线项下的方法，自“各精密加水至3ml，摇匀…… ”起，依法操作，测定吸光度，在标准曲线上求得磷的μg数，计算总磷含量。
4.无机磷
取总磷项下的细粉约0.4g，精密称定，置50ml量瓶中，加热水适量，超声30分钟，用水稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液5ml，置离心管中，精密加沉淀剂(取钼酸铵1g，加水385ml，高氯酸14ml使溶解)5ml，振摇数分钟,充分混匀后离心(3000转/分)15分钟，精密量取上清液2ml，照标准曲线项下的方法，自“各精密加水至3ml，摇匀……”起，依法操作，测定吸光度，在标准曲线上求得磷的μg数。精密量取水5ml ，同法作空白对照。计算无机磷含量。
5. 有机磷含量
有机磷含量=总磷含量-无机磷含量
6.回收率实验
3.5.1 考察样品硝化过程磷量是否有损失。取6份已知量磷标准溶液，依样品硝化过程操作并测定硝化后的磷含量，平均回收率为100.1%，说明硝化过程无磷损失。
3.5.2 考察样品中有机磷硝化是否完全。用与核苷酸结构类似的胞磷胆碱钠对照品为研究对象，定量称取6份胞磷胆碱钠对照品(则磷含量亦为已知)，依样品硝化过程操作并测定硝化后的磷含量，平均回收率为100.0%，说明依本文硝化条件，可以使样品中有机磷硝化完全。
3.5.3 考察无机磷测定的回收率。取6份已知量磷标准溶液，依无机磷测定方法操作，平均回收率为100.5%，回收率良好。
3.5.4 考察小分子物质对无机磷测定是否有干扰。选用环磷腺苷对照品(C10H12N5O6P M=329.2)，定量稀释至相应浓度，照无机磷方法测定，结果吸光度很小，证明未被沉淀剂沉淀的核苷酸小分子物质对无机磷的测定无干扰。
3.6 样品测定结果
表1 样品中总磷、无机磷和有机磷测定结果(μg / Tablet)
4 结果与讨论
4.1 配制沉淀剂和定磷试剂时应注意，钼酸铵的溶解性不好，注意观察其是否溶解完全，沉淀剂超声即可，定磷试剂要保证钼酸铵完全溶解后再加入抗坏血酸溶液。
4.2 显色时间的考察。取一定量的磷标准溶液，按实验方法，从加入定磷试剂后开始记时，从5min-120min，每隔5min测定一次溶液的吸光度。结果表明，25min吸光度达最大且恒定。
4.3 总磷的测定关键步骤在于硝化[4]。硝化时应注意：硝化管上应扣一漏斗形成回流，防止磷流失及硝化液蒸干;样品细粉避免加在管壁上，加硝化液时，尽量全部浸润。先用小火加热，避免底部及侧壁样品过快炭化，待无固体细粉可见时，调至中火加热至沸，后会有大量团状白色烟雾出现，待其变得逐渐稀薄，硝化液呈微黄色冷却后无色时，为硝化完全，关闭加热装置，静置至冷却;硝化后，是否挥酸。用磷标准溶液分别测回收率，挥酸的平均回收率为93.8%，不挥酸100.5%。故硝化后冷却直接转移，不需挥酸。
线性实验
1 对照品溶液的配制：取经105℃干燥至恒重的磷酸二氢钾0.4407g，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液1ml置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液(每1ml含磷10.05μg)。
2 标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0ml、0.3ml、0.6 ml、0.9 ml、1.2 ml、1.5 ml分别置试管中，各精密加入水至3ml，摇匀，分别精密加入定磷试剂(2.5%钼酸铵溶液:3mol/L硫酸溶液:水:10%抗坏血酸=1:1:2:1，临用前配制)3ml，摇匀，在45℃水浴中反应25分钟。以0号管作为空白对照，照分光光度法(中国药典2005年版二部附录ⅣA)，在660nm波长处测定吸光度(A)，以吸光度(A)为横坐标，含磷量(μg)为纵坐标，绘制标准曲线。
3.总磷量
取样品约0.15g，精密称定，置硝化管中，加混合酸(高氯酸:硝酸=3:2)4ml，硝化管上插入一漏斗，先小火加热至样品炭化，后改为中火硝化至出现大量白色烟雾，待烟雾由浓变稀薄，硝化液澄清透明时，停止加热，放冷，将内容物转移至50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，同法硝化制得空白对照，精密量取上述溶液各2ml，照标准曲线项下的方法，自“各精密加水至3ml，摇匀…… ”起，依法操作，测定吸光度，在标准曲线上求得磷的μg数，计算总磷含量。
4.无机磷
取总磷项下的细粉约0.4g，精密称定，置50ml量瓶中，加热水适量，超声30分钟，用水稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液5ml，置离心管中，精密加沉淀剂(取钼酸铵1g，加水385ml，高氯酸14ml使溶解)5ml，振摇数分钟,充分混匀后离心(3000转/分)15分钟，精密量取上清液2ml，照标准曲线项下的方法，自“各精密加水至3ml，摇匀……”起，依法操作，测定吸光度，在标准曲线上求得磷的μg数。精密量取水5ml ，同法作空白对照。计算无机磷含量。
5. 有机磷含量
有机磷含量=总磷含量-无机磷含量
6.回收率实验
3.5.1 考察样品硝化过程磷量是否有损失。取6份已知量磷标准溶液，依样品硝化过程操作并测定硝化后的磷含量，平均回收率为100.1%，说明硝化过程无磷损失。
3.5.2 考察样品中有机磷硝化是否完全。用与核苷酸结构类似的胞磷胆碱钠对照品为研究对象，定量称取6份胞磷胆碱钠对照品(则磷含量亦为已知)，依样品硝化过程操作并测定硝化后的磷含量，平均回收率为100.0%，说明依本文硝化条件，可以使样品中有机磷硝化完全。
3.5.3 考察无机磷测定的回收率。取6份已知量磷标准溶液，依无机磷测定方法操作，平均回收率为100.5%，回收率良好。
3.5.4 考察小分子物质对无机磷测定是否有干扰。选用环磷腺苷对照品(C10H12N5O6P M=329.2)，定量稀释至相应浓度，照无机磷方法测定，结果吸光度很小，证明未被沉淀剂沉淀的核苷酸小分子物质对无机磷的测定无干扰。
3.6 样品测定结果
表1 样品中总磷、无机磷和有机磷测定结果(μg / Tablet)
4 结果与讨论
4.1 配制沉淀剂和定磷试剂时应注意，钼酸铵的溶解性不好，注意观察其是否溶解完全，沉淀剂超声即可，定磷试剂要保证钼酸铵完全溶解后再加入抗坏血酸溶液。
4.2 显色时间的考察。取一定量的磷标准溶液，按实验方法，从加入定磷试剂后开始记时，从5min-120min，每隔5min测定一次溶液的吸光度。结果表明，25min吸光度达最大且恒定。
4.3 总磷的测定关键步骤在于硝化[4]。硝化时应注意：硝化管上应扣一漏斗形成回流，防止磷流失及硝化液蒸干;样品细粉避免加在管壁上，加硝化液时，尽量全部浸润。先用小火加热，避免底部及侧壁样品过快炭化，待无固体细粉可见时，调至中火加热至沸，后会有大量团状白色烟雾出现，待其变得逐渐稀薄，硝化液呈微黄色冷却后无色时，为硝化完全，关闭加热装置，静置至冷却;硝化后，是否挥酸。用磷标准溶液分别测回收率，挥酸的平均回收率为93.8%，不挥酸100.5%。故硝化后冷却直接转移，不需挥酸。