考马斯亮蓝G-250染色法/实验步骤

原理：
考马斯亮蓝G - 250( Coomassie briliant blue G - 250)测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。该染料在游离状态下呈红色,在稀酸溶液中当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色,前者最大光吸收在465 nm.后者在595 nm。在一定蛋白质浓度范围内(1-1000ug),蛋白质与色素结合物在595 nm波长下的吸光度与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质的定量测定。
考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合反应十分迅速,2min左右即达到平衡。其结合物在室温下1 h内保持稳定。此法灵敏度高(比斐林一酚法还高4倍),易于操作,干扰物质少,是一种比较好的定量法。其缺点是在蛋白质含量很高时线性偏低,且不同来源蛋白质与色素结合状况有一定差异。
材料、仪器设备及试剂
(一)材料
小麦叶片及其他植物材料。
(二)仪器设备
722分光光度计,研钵,烧杯，量瓶，移液管,具塞刻度试管等。
(三)试剂
(1)标准蛋白质溶液:100 ug/mL. 牛血清白蛋白:称取牛血清蛋白25 mg,加水溶解并定容至100mL,吸取上述溶液40mL,用蒸馏水稀释至100mL即可。
(2)考马斯亮蓝G-250溶液:称取100 mg考马斯亮蓝G-250,溶于50 mL90%乙醇中,加人100 mL 85% (W/V)的磷酸,再用蒸馏水定容到1L,贮于棕色瓶中。常温下可保存一个月。
考马斯亮蓝