一、背景
JM109感受态细胞是通过理化方法诱导JM109细胞,使其处于最适摄取和容纳外来DNA的状态。JM109感受态细胞是通过处理使细胞的通透性变大,直观的说,使得细胞膜表面出现一些孔洞,便于外源基因或载体进入感受态细胞。由于细胞膜的流动性,这种孔洞会被细胞自身所修复。
二、制备方法
(一)CaCl2法
1、将快速生长的大肠杆菌置于经低温(0)预处理的低渗氯化钙溶液中,便会造成细胞膨胀,同时Ca2+会使细胞膜磷脂双分子层形成液晶结构,促使细胞外膜与内膜间隙中的部分核酸酶解离开来,离开所在区域,诱导细胞成为感受态细胞。细胞膜通透性发生变化,极易与外源DNA相粘附并在细胞表面形成抗脱氧核糖核酸酶的羟基-磷酸钙复合物。联合其它的二价金属离子(如Mn、Co)、DMSO或还原剂等物质处理细菌,则可使转化率提高100~1000倍。
