培养基灭菌时不同类型培养基应该如何选择合适的灭菌方法？
2026-02-09 14:39阅读：
培养基灭菌时不同类型培养基应该如何选择合适的灭菌方法？
培养基的灭菌方法需根据其成分（尤其是热敏感性成分）、理化性质及微生物污染风险选择，核心目标是杀灭所有微生物（包括芽孢）同时避免有效成分被破坏。以下是不同类型培养基的灭菌方法选择原则及实例：
一、高压蒸汽灭菌（最常用，适用于耐热成分培养基）
原理：在 121（103.4kPa）或
134（206.8kPa）高压蒸汽下，通过高温和蒸汽穿透作用杀灭微生物，包括芽孢。
适用范围：含耐热成分（如蛋白胨、琼脂、盐类、糖（单糖 /
双糖）、氨基酸（多数）等）的培养基。
典型实例：
基础培养基：如营养琼脂、牛肉膏蛋白胨培养基、LB
培养基（含酵母提取物、蛋白胨，均耐热）。
鉴别 / 选择培养基：如 SS 琼脂（含胆盐需注意，但胆盐在
121短期灭菌可耐受）、MAC 琼脂（含乳糖和中性红，乳糖耐热，中性红少量可耐受）。
固体培养基：含琼脂的培养基（琼脂熔点约 95，凝固点 40-50，121灭菌不破坏）。
灭菌参数：多数为 121、20-30
分钟；含大量固体颗粒或容积较大时，可延长至 30-40 分钟。
二、过滤灭菌（适用于热敏感成分培养基）
原理：用 0.22μm（或
0.1μm，针对支原体）孔径的无菌滤膜过滤，物理性去除微生物（不依赖高温），适用于含热敏感成分的培养基。
适用范围：含以下成分的培养基：
热不稳定生物活性物质：抗生素（如青霉素、链霉素，60以上易分解）、维生素（如
VB1、VC，高温易破坏）、激素、酶制剂（如溶菌酶）。
易挥发 /
分解的小分子：某些糖类（如蔗糖浓度过高时易焦化，低浓度可高压，但高浓度需过滤）、某些氨基酸（如色氨酸、胱氨酸，高温易分解）。
血清 /
体液类：如小牛血清、腹水（含多种蛋白质和活性因子，高温会变性）。
典型实例：
抗生素选择培养基：如含青霉素的 LB 选择培养基（青霉素
100即失活，需过滤后加入已高压灭菌的基础培养基）。
细胞培养基：如
DMEM（含血清、维生素、生长因子，需先高压灭菌基础成分，再过滤添加敏感成分）。
特殊微生物培养基：如培养乳酸菌的某些培养基（含维生素 B
族，需过滤）。
操作要点：
滤膜需提前灭菌（干热灭菌 121、2
小时），过滤装置在超净台内无菌操作。
通常先将培养基中耐热成分高压灭菌，冷却至
40-50后，在无菌条件下加入过滤灭菌的敏感成分。
三、煮沸灭菌（适用于简单、低风险培养基，少用）
原理：100煮沸 15-30
分钟，杀灭繁殖体，但无法杀灭芽孢，仅适用于对无菌要求不严格的临时培养基。
适用范围：如临时制备的生理盐水（仅需杀灭一般杂菌，无需抗芽孢）、某些应急用的简单液体培养基（不作为正式检测用）。
四、干热灭菌（仅适用于固体培养基成分，极少直接用于成品培养基）
原理：160-180干热空气灭菌 2-3
小时，通过氧化作用杀灭微生物，适用于耐高温、怕潮湿的固体成分。
适用范围：通常不用于成品培养基（因会破坏营养成分），仅用于培养基原料（如某些干燥的蛋白胨）或玻璃器皿灭菌。
五、关键注意事项
复合培养基的分步处理：含耐热和热敏感成分的混合培养基，需采用“高压灭菌
+ 过滤灭菌”结合法。例如：
基础培养基先高压灭菌，冷却后在无菌条件下加入过滤灭菌的抗生素（如氨苄青霉素）。
避免过度灭菌：即使耐热培养基，也需严格控制灭菌时间（如超过 30
分钟可能导致糖焦化、氨基酸分解，影响 pH 和营养）。
特殊成分的替代：若某成分热敏感且无法过滤（如某些胶体），可尝试用耐热类似物替代（如用葡萄糖代替蔗糖，前者更耐热）。
综上，灭菌方法的核心是匹配培养基成分的热稳定性：耐热成分首选高压蒸汽灭菌，热敏感成分必须用过滤灭菌，简单低风险场景可考虑煮沸灭菌。
北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！
