实验一 植物组织中可溶性糖含量的测定
2006-03-10 13:51阅读：
实验一
植物组织中可溶性糖含量的测定
一、目的
通过实训，使学生掌握植物组织中可溶性糖含量的测定方法；掌握标准曲线的绘制方法和分光光度计的使用方法。
二、原理
植物在个体发育的各个时期代谢活动要发生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外，其含量也随之发生变化。了解可溶性糖含量的变化，在生理上和实践上都有重要的意义。这里介绍蒽酮比色法。糖在硫酸的作用下生成糖醛，糖醛再与蒽酮作用形成一种绿色的络合物。颜色的深浅与糖含量有关。该方法简便没有专一性，对于绝大部分的碳水化合物都与蒽酮反应，产生颜色。
三、仪器药品
（一）仪器：分光光度计、天平、研钵、恒温水浴锅、100ml烧杯、100ml
容量瓶、玻璃棒、三角烧杯、试管10支、试管架、试管夹、铁笼6个、1ml移液管、漏斗、滤纸、三角铁架、电炉、记号笔、坐标方格纸（绘曲线用）
（二）药品：95%乙醇、草酸钠（固体）、饱和醋酸铅液、蒸馏水
葡萄糖标准液：取称已在80℃烘箱烘至恒重的葡萄糖100mg，配制成500ml溶液，即得每1ml含糖量为200ug的标准溶液。
蒽酮试剂：称取1g经纯化的蒽酮溶解于1000ml稀硫酸溶液中即得。（稀硫酸溶液由760ml浓硫酸（比重1.84）稀释成1000ml而成。）
四、实验步骤
1、可溶性糖的提取
称取重约1g新鲜植物叶子（自选），于研钵中仔细研磨，研时加少许乙醇，直至得到均匀的浆状物为止，倒入烧杯中，用热水（70℃）洗涤研钵，洗液并入烧杯中。再加入蒸馏水约30—40ml，将烧杯放在水浴锅中加热，保持温度70—80℃约半小时。冷却后一滴一滴地加入饱和中性醋酸铅以除去混合液中的蛋白质，直至不再形成白色沉淀为止；然后将此混合物以干燥漏斗滤于一干燥的三角烧杯中，瓶中事先放入有少量约0.2-0.4g的草酸钠粉末，以除去滤液中多余的醋酸铅，使生成的草酸铅沉淀，再行过滤，滤后定容至100ml所得透明滤液即为可溶性糖提取液。
2、颜色和比色
吸取上述提取液1ml，放入一干净的试管中，加入蒽酮试剂5ml混合之，于沸水中煮沸10分钟；取出冷却，然后于分光光度计波长620nm处，测得光密度（光吸收值），从标准曲线中查得滤液中所含糖量，然后计算样品中含糖的百分数。以蒸馏水液为对照。
3、绘制标准曲线
另取标准糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液，浓度分别是每1ml含糖0，25，50，75，100，120，150，200ug。如上述方法分别测得其光密度（光吸收值），以光密度（光吸收值）为纵坐标，以糖浓度为横坐标，在方格纸上绘制出标准曲线。
4、计算样品中含糖量（1mg=1000ug）设A为植物样品稀释后的体积；C为提取液的含糖量（ug/ml）；则含量%=A*C/W
W为植物组织鲜重量。
五、作业
1、实验报告。
2、应用本法测得的糖包括哪些类型的碳水化合物？
备注：样品液显色若颜色很深，其吸光度超过标准曲线浓度范围，则应将样品提取液适当的稀释后再显色测定。
