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人脐带间充质干细胞永生化的使用方法与注意事项!

2023-06-06 10:44阅读:
人脐带间充质干细胞永生化的使用方法与注意事项!


一、细胞简介
脐带间充质干细胞是指存在于新生人脐带组织中的一种多功能干细胞,它能分化成许多种组织细胞,具有广阔的临床应用前景。能具有较强的免疫调节作用,可用于治疗红斑狼疮和硬皮病等自身免疫性疾病,降低细胞或器官移植后的免疫排斥反应,提高细胞或器官移植的成功率;能促进造血恢复功能,与单一造血干细胞移植比较,间充质干细胞和造血干细胞共移植能显著提高白血病和难治性贫血等疾病的治疗效果;能修复损伤或病变的组织器官,用于治疗骨和肌肉衰退性疾病、心脑血管疾病、肝病、脑及脊髓神 经损伤和老年痴呆等。
本公司生产的人脐带间充质干细胞
采用酶解法制备而来,细胞总量约为5×105/T25 方瓶,细胞纯度可达 90%以上,显示 CD44、CD29 阳性,CD45 阴性,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母 和真菌等。

二、产品信息
平台编号:Bio-129856
规格:1×10Cells/T25培养瓶
细胞信息:永生化细胞
细胞名称:人脐带间充质干细胞
培养基信息:我们推荐使用研制的人脐带间充质干细胞专用完全培养液作为体外培养人脐带间充质干细胞的培养基。
注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用(产品信息以出库为准)

三、细胞详述
脐带是哺乳类的连接胎儿和胎盘的管状结构。脐带中通过尿膜的血管即脐动脉和脐静脉,卵黄囊的血管即脐肠系膜动脉及脐肠系膜静脉。在子宫中,子宫动脉在胎盘的母体部分出的毛细血管,与胎盘的子体部胎儿毛细血管靠近,在此处母体和胎儿的血液间进行CO2和O2,代谢产物即代谢废物和营养物质的交换。脐动脉将胎儿来的废物运送至胎盘,脐静脉将O2和营养物质从胎盘运送给胎儿。
脐带间充质干细胞是指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞,它能分化成许多种组织细胞,并且具有取材方便,无伦理学争议等优点,因此越来越受到研究工作者们的关注。

四、细胞特性
1)细胞来源于人脐带组织。
2)细胞鉴定:CD105免疫荧光染色为阳性。
3)经鉴定细胞纯度高于90%。
4)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
5)细胞生长方式:梭形细胞,不规则细胞,贴壁培养。

五、产品的运输和保存
视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。

六、使用方法
1、您收到细胞后,请按照以下方法进行操作:取出 T25 方瓶,75%酒精擦拭培养瓶,拆下封口膜,放入 37,5%CO2细胞培养箱中静置 2-3 小时,以稳定细胞状态,然后打开瓶子回收瓶子中培养液作为后续培养此细胞的完全培养液,最后按照后面细胞传代步骤进行细胞传代培养。
2、细胞传代:
1)细胞生长至覆盖培养瓶的 90%面积时,弃 T25 方瓶中的培养液,用 PBS 清洗细胞 3 次;
2)添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 2ml 至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至 15ml 离心管中,1200rpm/min,离心5min;
3)弃上清,沉淀细胞用 12ml 完全培养基重悬,然后按 1:2 比例进行分瓶传代,最后放入 37,5%CO2 细胞培养箱中培养;
4)待细胞完全贴壁后,观察培养结果,之后进行换液培养或传代。
3、细胞冻存:
1)细胞生长至覆盖培养瓶的 90%面积时,弃 T25 方瓶中的培养液,用 PBS 清洗细胞 3 次;
2)添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 2ml 至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后轻轻吹打细胞使之脱落,再加入完全培养液终止消化,然后将悬液转移至 15ml 离心管中,1200rpm/min,离心5min;
3)用适当量的冻存液(FBS:DMSO=9:1)重悬细胞,并放置于冻存管中;
4)先将细胞冻存管放置于-20 1h,然后将其移入-80过夜,24h 后转入液氮中进行长期保存。
4、细胞复苏:
1)从液氮中取出细胞冻存管(注意:佩戴防爆管面具),快速将其置入 37水浴中解冻,直至冻存管中无结晶,然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁;
2)将冻存管中的细胞转移至含 5ml 完全培养液无菌离心管中,1200rpm 离心 5min,然后加入 5ml 完全培养液混匀细胞,将细胞悬液转移至 T25 培养瓶中,放置于 37,5%CO2细胞培养箱中培养;
3)第二天,换用新鲜完全培养基继续培养。

七、注意事项
1、培养基于 4条件下可保存 3-6 个月;
2、在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作;
3、该细胞只可用于科研。

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