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弯曲高温单孢菌的实验内容及培养与保藏方法！

2023-06-29 10:56阅读：

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弯曲高温单孢菌的实验内容及培养与保藏方法！


弯曲高温单孢菌气丝长30—50（最长可达70）微米。单个孢子排列为宽6—10微米（最窄是4）的簇团或穗状体。孢子圆形，1.2—1.8微米或纺锤形、柠檬形或梨形， 0.6—1.5×0.3—0.9微米，表面有小刺（新型株B9）。

一、菌种简介
平台编号：Bio-79803
规格：Freeze-Dried
拉丁属名：Thermomonospora Curvata
菌株名称：弯曲高温单孢菌
用途：ATCC原装进口
注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、详细描述
Thermomonospora curvata Henssen 拉丁名
(ATCC® 19995™

用途：ATCC原装进口
注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、详细描述
Thermomonospora curvata Henssen 拉丁名
(ATCC® 19995™) 统一编号
Strain Designations 菌种别名 : DSM 43183 [B9, CBS 141.67] /
Type Strain 模式菌株 : yes /
Biosafety Level: 1
Application 用途 Biotechnology
Isolation 分离源 Straw
Biosafety Level 生物安全等级 1
Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.
Product Format 提供形式 freeze-dried
receptrol® no
Genome Sequenced Strain Yes
Type Strain 模式菌株yes (type strain)
Comments 注释 Genome sequencing strain
Medium培养基ATCC® Medium 1489: Hickey-Tresner agar
Growth Conditions 生长条件
Temperature 培养温度: 50.0
Name of Depositor 寄存人DSM
Chain of Custody 来源国家 ATCC <<--DSM<<--(<<--- A. Henssen B9)
Isolation 分离源 Straw
References 参考文献 Henssen A, Schnepf E. On the knowledge of thermophilic actinomycetes. Arch. Mikrobiol. 57: 214-231, 1967. PubMed: 5600778 Skerman VB, et al. Approved lists of bacterial names. Int J Syst Bacteriol 30: 225-420, 1980.

三、菌株性质
气丝垩白色，基丝无色至黄色。50培养：蔗糖硝酸盐琼脂：气丝中等。基丝无色。B9：少数斑点状菌落。葡糖天冬素琼脂：B9：气丝白色；基丝少。甘油天冬素琼脂：气丝有或无。基丝黄色。肉精琼脂：气丝较厚。基丝好，部分黄色。B9：气丝白色；基丝黄色至褐色。酵母葡萄糖琼脂：几无生长。B9：气丝白色，发育迟晚；基丝微褐色。酵母淀粉琼脂：B9：气丝白色。基丝好，黄色至橙色。酵母葡萄糖琼脂：气丝可能有。基丝无色。粪琼脂：B9：气丝白色。基丝好。纤维素糊精琼脂：气丝散生。基丝无色。马铃薯葡萄糖琼脂：无气丝。基丝分散。 B9：同。马铃薯块：气丝局部。基丝黄色（单个菌落）。基质变暗。明胶不液化。牛奶16天不变。淀粉不水解。硝酸盐还原弱。泛温嗜热：28和65生长少（B9：4和65生长少，28不长）；生长适温50。Stutzenberger 1972年报告用此菌生产纤维素酶。

四、培养方法
培养基：乳酸菌培养基 :Lacto-casein peptone (乳酪蛋白胨) 10g Beef extract (牛肉膏) 10g Yeast extract (酵母膏) 5g Glucose (葡萄糖) 5g Tween (吐温) 80 1g K2HPO4 2g Na-acetate (醋酸钠) 5g Diamine citrate (柠檬酸二胺) 2g MgSO4.7H2O 0.2g MnSO4.H2O 0.05g Distilled water (蒸馏水) 1000m pH 6.5-6.8。121,15min。
传代方法： 冻干管:75%酒精擦拭管壁,后用砂轮在冻干管壁划两圈,掰断,用200μL无菌水或培养基充分溶解,平板涂布,活化培养。斜面:试管口用75%酒精擦拭后,火焰灼烧,后用无菌接种铲切块,挑取接入平板或斜面,培养。

五、实验内容
1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查
2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物
3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查
4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌

六、保藏方法
1、传代培养保藏法
又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等(后者作保藏厌氧细菌用),培养后于4-6冰箱内保存。
2、液体石蜡覆盖保藏法
是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。
3、载体保藏法
是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。
4、寄主保藏法
用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物,如病毒、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代,此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。
5、冷冻保藏法
可分低温冰箱(-20-30,-50-80)、干冰酒精快速冻结(约-70)和液氮(-196)等保藏法。
6、冷冻干燥保藏法
先使微生物在极低温度(-70左右)下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液,以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。

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