琼脂糖凝胶电泳是分子生物学实验室中分离鉴定核酸的常规方法,核酸是两性电解质,其等电点为pH2-2.5,在常规的电泳缓冲液中(pH约8.5),核酸分子带负电荷,在电场中向正极移动。
通过电泳技术,可以分离出不同大小和构象的RNA分子,并通过观察条带的数量、大小和形态,可以判断出RNA分子的完整性。而在这个过程中,电泳缓冲液的主要作用就是保持pH,并使溶液具有一定的导电性。TAE(Tris-乙酸缓冲液)和TBE(TRIS-硼酸电泳缓冲液)是比较常用的缓冲液,它们到底有什么区别呢?
TAE(Tris-乙酸缓冲液)
优点:
对于大于13kb的DNA片段,TAE缓冲液能取得更好的分离效果。
在TAE缓冲液中,DNA的超螺旋状态在电泳过程中能够更好地保持其真实的相对分子质量。
适用于回收DNA片段,后续进行酶切反应等。
缺点:
