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人乳腺癌他莫昔芬耐药细胞株的培养操作规程及注意事项！

2025-05-06 16:22阅读：

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人乳腺癌他莫昔芬耐药细胞株的培养操作规程及注意事项！



一、细胞简介
平台编号：Bio-132959
规格：1×10Cells/T25培养瓶
细胞信息：MCF-7/TAM
细胞名称：MCF-7/TAM人乳腺癌他莫昔芬耐药细胞株
细胞别称：MCF-7/TAM；人乳腺癌他莫昔芬耐药细胞株
种属来源：人
组织来源：乳腺，乳房
生长特性：贴壁生长
细胞形态：上皮细胞样
细胞代数：10代以内
细胞规格：1x106
cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装
支原体检测：无
培养基：1640+10S+1%PS
培养条件：气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37
冻存条件：无血清冻存液，液氮储存
细胞货期：现货，1周左右
运输方式：复苏发货（T25瓶免运输费用）/ 冻存发货（需加干冰运输费用）
供应限制：仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用
注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、细胞特性
1）来源：人乳腺
2）形态：人乳腺癌他莫昔芬耐药细胞，贴壁生长
3）含量：>1x106 细胞数
4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装
5) 用途：仅供科研使用。

三、细胞的运输和保存
干冰运输及复苏好存活细胞
（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

四、细胞接收后的处理
1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。
3）贴壁细胞：细胞在37培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。

五、细胞培养步骤
1、培养基及培养冻存条件准备：
1）准备DMEM（含NaHCO3 1.5g/L，推荐：(GIBCO，添加NaHCO3 1.5g/L) ）培养基；优质胎牛血清，10%；双抗 1%；
注意：细胞冻存后复苏存活率只有50%左右，建议加大冻存密度。该细胞在DMEM(含1.5g/LNaHCO3)培养基中生长良好，大部分品牌的DMEM含有较高浓度的NaHCO3（3.7g/L），若使用DMEM（3.7g/L NaHCO3）培养基培养细胞时需要提高CO2浓度（7%-10%）。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：39，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
2、细胞处理：
1）冻存细胞的复苏：
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：
1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10S的培养基来终止消化。
3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

下面T25瓶为例；
1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.
2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

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