流感嗜血杆菌的微生物学检查是诊断其感染的关键，主要包括以下方法：
一、标本采集
根据感染部位采集相应标本：
呼吸道感染（如肺炎、支气管炎）：取痰液、鼻咽拭子；
中枢神经系统感染（如脑膜炎）：取脑脊液；
败血症：取血液；
局部感染（如中耳炎、鼻窦炎）：取渗出液或脓液等。
二、直接涂片镜检
标本涂片后进行革兰氏染色，镜下可见 革兰氏阴性短小杆菌，形态多样，可呈球杆状、短杆状或长丝状，常成对或短链排列，无芽胞；有荚膜的菌株可见明显荚膜。
脑
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流感嗜血杆菌的微生物学检查是诊断其感染的关键，主要包括以下方法：
一、标本采集
根据感染部位采集相应标本：
呼吸道感染（如肺炎、支气管炎）：取痰液、鼻咽拭子；
中枢神经系统感染（如脑膜炎）：取脑脊液；
败血症：取血液；
局部感染（如中耳炎、鼻窦炎）：取渗出液或脓液等。
二、直接涂片镜检
标本涂片后进行革兰氏染色，镜下可见 革兰氏阴性短小杆菌，形态多样，可呈球杆状、短杆状或长丝状，常成对或短链排列，无芽胞；有荚膜的菌株可见明显荚膜。
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脊液标本离心后取沉淀物涂片，若发现典型形态的革兰氏阴性杆菌，结合临床症状可初步提示流感嗜血杆菌感染。
三、分离培养与鉴定
（1）培养特性
流感嗜血杆菌为需氧或兼性厌氧菌，最适生长温度 35~37，pH 7.6~7.8。
生长依赖 X 因子（血红素及其衍生物） 和 V 因子（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，NAD），故常用 巧克力琼脂平板（经加热处理的血平板，可释放 X 和 V 因子）培养。
培养 24~48 小时后，形成 圆形、光滑、湿润、边缘整齐的小菌落（直径 0.5~1.0mm），无色透明或半透明，菌落易乳化。
（2）鉴定试验
卫星现象试验：将待检菌与金黄色葡萄球菌共同划线接种于血平板，37培养 18~24 小时。由于金黄色葡萄球菌可合成 V 因子，待检菌在其菌落周围生长旺盛（形成“卫星”状菌落），而远离处因缺乏 V 因子生长不良，此为流感嗜血杆菌的特征性表现。
生化反应：发酵葡萄糖产酸不产气，不发酵乳糖；氧化酶试验阳性，触酶试验阳性（部分菌株）；还原硝酸盐为亚硝酸盐。
血清型鉴定：通过荚膜肿胀试验或乳胶凝集试验检测荚膜抗原，可区分 a~f 型（其中 b 型 Hib 致病性最强）。
四、抗原检测
对于脑膜炎等严重感染，可采用 乳胶凝集试验 直接检测脑脊液、血液或尿液中的 Hib 荚膜多糖抗原，快速诊断（尤其适用于已使用抗生素、细菌培养阴性的病例），敏感性和特异性较高。
五、分子生物学方法
聚合酶链反应（PCR）：检测流感嗜血杆菌的特异性基因，敏感性极高，适用于快速诊断或培养阴性的疑难病例。
其他分子技术也可用于特异性鉴定。
六、药敏试验
由于流感嗜血杆菌耐药菌株增多，对分离出的菌株需进行药敏试验（如纸片扩散法或微量肉汤稀释法），指导临床选择敏感抗生素。
通过上述方法的联合应用，可准确、快速诊断流感嗜血杆菌感染，为临床治疗提供依据。
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三、分离培养与鉴定
（1）培养特性
流感嗜血杆菌为需氧或兼性厌氧菌，最适生长温度 35~37，pH 7.6~7.8。
生长依赖 X 因子（血红素及其衍生物） 和 V 因子（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，NAD），故常用 巧克力琼脂平板（经加热处理的血平板，可释放 X 和 V 因子）培养。
培养 24~48 小时后，形成 圆形、光滑、湿润、边缘整齐的小菌落（直径 0.5~1.0mm），无色透明或半透明，菌落易乳化。
（2）鉴定试验
卫星现象试验：将待检菌与金黄色葡萄球菌共同划线接种于血平板，37培养 18~24 小时。由于金黄色葡萄球菌可合成 V 因子，待检菌在其菌落周围生长旺盛（形成“卫星”状菌落），而远离处因缺乏 V 因子生长不良，此为流感嗜血杆菌的特征性表现。
生化反应：发酵葡萄糖产酸不产气，不发酵乳糖；氧化酶试验阳性，触酶试验阳性（部分菌株）；还原硝酸盐为亚硝酸盐。
血清型鉴定：通过荚膜肿胀试验或乳胶凝集试验检测荚膜抗原，可区分 a~f 型（其中 b 型 Hib 致病性最强）。
四、抗原检测
对于脑膜炎等严重感染，可采用 乳胶凝集试验 直接检测脑脊液、血液或尿液中的 Hib 荚膜多糖抗原，快速诊断（尤其适用于已使用抗生素、细菌培养阴性的病例），敏感性和特异性较高。
五、分子生物学方法
聚合酶链反应（PCR）：检测流感嗜血杆菌的特异性基因，敏感性极高，适用于快速诊断或培养阴性的疑难病例。
其他分子技术也可用于特异性鉴定。
六、药敏试验
由于流感嗜血杆菌耐药菌株增多，对分离出的菌株需进行药敏试验（如纸片扩散法或微量肉汤稀释法），指导临床选择敏感抗生素。
通过上述方法的联合应用，可准确、快速诊断流感嗜血杆菌感染，为临床治疗提供依据。
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