新浪博客

分子生物学实验核酸污染的防控措施与应急处理方法！

2026-01-08 15:33阅读：

http://blog.sina.cn/dpool/blog/u/7058810482

分子生物学实验核酸污染的防控措施与应急处理方法！



百欧博伟生物：在分子生物学实验中，核酸污染是导致假阳性、实验结果偏差甚至实验失败的主要原因之一。以下是关于核酸污染的全面解析及应对策略：

一、核酸污染的常见来源

1、样本交叉污染

移液器、枪头或操作台面残留的核酸（尤其是高浓度扩增产物）。

不同样本间操作不当导致的交叉污染。

2、气溶胶污染

离心、剧烈混匀或开盖操作时产生的气溶胶（如扩增产物气溶胶）。

3、试剂/耗材污染

试剂或水被外源核酸污染（如质粒、基因组DNA、RNA等）。

耗材（离心管、枪头）生产过程中携带的核酸残留。

4、实验室环境残留

长期实验积累的核酸污染，尤其是扩增区与样本制备区未严格分区时。

二、预防核酸污染的关键措施

1、实验室严格分区

四区分离原则：

试剂准备区（配置主混合液）

样本制备区（核酸提取）

扩增区（PCR反应）

产物分析区（电泳、测序等）

各区域设备、耗材专用，严禁逆向流动。

2、实验操作规范

使用带滤芯的枪头，避免移液器污染。

操作时戴手套并频繁更换，避免直接接触核酸。

开盖前离心管短暂离心，避免液体飞溅。

分装试剂，避免反复冻融或污染。

3、耗材与试剂处理

选择无核酸酶认证的耗材。

对可能污染的试剂加入 UDG酶，降解含dU的污染产物。

使用 DNase I/RNase A 预处理工作台和仪器表面。

4、阴性质控设置

每批次实验设置 阴性对照（如水对照或无模板对照），监测污染情况。

三、污染发生后的应急处理

1、全面更换耗材与试剂

丢弃可能污染的枪头、离心管，使用新批次试剂。

2、实验室深度清洁

用 10%次氯酸钠 或 专用核酸清除剂 擦拭台面、仪器。

紫外线照射实验区域30分钟以上（对裸露DNA有效）。

3、试剂去污染处理

加入 处理试剂（37°C 30分钟），随后加热灭活（75°C 10分钟）。

4、重新验证实验体系

通过阴性对照确认污染消除后，再继续实验。

四、特殊场景的污染防控

qPCR/ddPCR：避免扩增产物开盖，使用封闭式检测系统。

CRISPR实验：gRNA或ssDNA易残留，操作后彻底清洁设备。

RNA实验：RNase污染可能导致RNA降解，需同时防范RNase和核酸污染。

五、长期管理策略

定期监测：每月用阴性对照检测实验室背景污染。

人员培训：强化无菌操作意识，规范实验流程。

设备维护：移液器定期校准并消毒，超净台/生物安全柜定期更换滤膜。

六、污染后果警示

核酸污染可能导致：

实验数据不可靠，需重复实验造成时间和试剂浪费。

发表论文结果被质疑，影响学术声誉。

临床检测中假阳性引发误诊（如病原体检测）。

通过严格的分区管理、规范操作和系统性防控，可显著降低核酸污染风险。一旦发现污染，务必彻底清除后再继续实验，确保结果的准确性和可靠性！

北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！
分子生物学实验核酸污染的防控措施与应急处理方法！

我的更多文章

下载客户端阅读体验更佳

APP专享