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兔原代支气管平滑肌细胞的分离培养与关键条件及应用领域!

2026-01-22 15:44阅读:
兔原代支气管平滑肌细胞的分离培养与关键条件及应用领域!


兔原代支气管平滑肌细胞Rabbit Bronchial Smooth Muscle Cells)是直接从兔支气管壁平滑肌组织中分离、纯化得到的细胞,是研究哮喘、慢阻肺等呼吸系统疾病的经典体外模型。

一、核心生物学特性

形态特征:典型的成纤维细胞样,呈长梭形。细胞贴壁生长,密度低时呈网状分布,密度高时则呈旋涡状或栅栏状排列。

鉴定标志:常用α- 平滑肌肌动蛋白(α-SMA) 免疫荧光染色鉴定,阳性率可达 90% 以上。

核心功能:维持支气管张力与形态;通过收缩和舒张调节气道口径;分泌细胞因子,参与局部炎症与免疫调节。

二、分离培养与关键条件

常用分离方法:胰蛋白酶 - 胶原酶联合消化法或组织贴块法。

标准培养条件:

培养基:常用 DMEM/F12 培养基添加胎牛血清(FBS)、青霉素/链霉素。

培养环境:37,5% CO 恒温培养箱。

传代与冻存:通常可传 5 代左右,3 代内细胞状态最佳。冻存需使用含二甲基亚砜(DMSO)的专用冻存液,程序降温后储存于液氮。

三、主要应用领域

基础研究:探究气道平滑肌收缩/舒张的信号通路、细胞增殖与表型转化机制。

疾病模型:构建哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)等疾病的体外模型,用于发病机制研究。

药物筛选:评估候选药物对气道平滑肌的松弛、增殖抑制等作用,进行药物活性与毒性评价。

四、常见问题与注意事项

污染防控:原代培养易受细菌、真菌及支原体污染,操作需严格无菌,定期检测。

细胞纯度:易混杂成纤维细胞等,需通过差速贴壁、免疫磁珠分选等方法纯化。

表型维持:长期传代易导致细胞表型改变,实验应尽量使用低代次细胞。

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