大肠杆菌生长曲线的测定之实验原理与操作步骤及数据处理！

2026-02-05 15:57阅读：

http://blog.sina.cn/dpool/blog/u/7058810482

大肠杆菌生长曲线的测定之实验原理与操作步骤及数据处理！

大肠杆菌生长曲线的测定是微生物学研究中常用的实验，通过监测一定时间内细菌数量的变化，绘制生长曲线，可反映其生长规律（迟缓期、对数期、稳定期、衰亡期四个阶段）。以下是详细的实验步骤和注意事项：

一、实验原理

大肠杆菌在适宜的液体培养基中生长时，其数量随时间呈现规律性变化。通过定时取样，测定菌液的吸光度（OD 值）或活菌数，以时间为横坐标、细菌数量（或 OD 值）为纵坐标，绘制曲线即可反映其生长阶段。

OD 值测定：基于细菌悬液的浊度与细胞数量正相关（在一定范围内），操作简便快速，适用于动态监测。

活菌计数：如平板计数法，结果更直观，但耗时较长。

二、实验材料

菌株：大肠杆菌

。

培养基：LB 液体培养基（胰蛋白胨 10g、酵母提取物 5g、NaCl 10g，加水定容至 1L，pH 调至 7.0，121高压灭菌 20 分钟）。

仪器与试剂：

摇床（37，恒温振荡）、分光光度计（波长 600nm）、超净工作台、高压灭菌锅。

试管、锥形瓶（250mL）、移液枪及枪头（灭菌）、比色皿（灭菌或用无水乙醇擦拭）。

三、实验步骤

1、种子液制备

无菌操作：在超净工作台中，挑取大肠杆菌单菌落，接种至含 5-10mL LB 液体培养基的试管中。

培养：37、180-200rpm 振荡培养过夜（约 12-16h），至对数期（OD≈0.6-1.0）。

2、接种与培养

取 250mL 锥形瓶，加入 100mL LB 液体培养基，按 1%（体积比）接种量加入种子液（即 1mL 种子液 + 100mL 培养基），混匀。

标记为“实验组”，同时设置“空白对照”（仅 100mL LB 培养基，用于校正 OD 值）。

将锥形瓶置于 37、180rpm 摇床中培养，同时记录起始时间（0h）。

3、定时取样与 OD 值测定

取样时间：从 0h 开始，每 1-2h 取样一次（前 6h 可密集，后期可延长至 2-4h），持续 24-48h（覆盖完整生长周期）。

取样方法：每次从实验组和空白组中各取 2mL 菌液（无菌操作，避免污染），分别装入灭菌试管中。

OD测定：

分光光度计预热 30 分钟，调波长至 600nm。

用空白培养基（LB）校正分光光度计至 OD 值为 0。

将实验组菌液倒入比色皿，测定 OD值，记录数据。

若 OD 值超过 0.8（可能偏离线性关系），需用 LB 培养基稀释（如 1:2、1:5），测定后乘以稀释倍数。

4、活菌计数（可选，用于验证）

取不同时间点的菌液，用无菌生理盐水梯度稀释（如 10至 10）。

每个稀释度取 0.1mL 涂布于 LB 固体培养基平板，37培养 16-24h 后计数 CFU，计算每毫升活菌数（CFU/mL = 菌落数 × 稀释倍数 ÷0.1）。

四、数据处理与曲线绘制
绘制曲线：以时间为横坐标，OD值（或 lg (CFU/mL)）为纵坐标，用 Excel 或 Origin 绘图，标注四个生长阶段：

迟缓期：OD 值增长缓慢（细菌适应环境，合成酶类）。

对数期：OD 值快速线性增长（细菌以指数方式繁殖，代谢旺盛）。

稳定期：OD 值趋于平稳（繁殖与死亡平衡，营养消耗、代谢产物积累）。

衰亡期：OD 值下降（死亡速率 > 繁殖速率）。

五、注意事项

无菌操作：取样时避免污染，枪头、试管需灭菌，操作在超净台进行。

OD 值线性范围：大肠杆菌 OD在 0.2-0.8 范围内与细胞浓度呈线性，超过需稀释，否则结果偏差。

摇床条件稳定：温度、转速需恒定，避免影响细菌生长速率。

空白校正：每次测定前用 LB 培养基校正，消除培养基本身的浊度干扰。

重复实验：建议做 3 次重复，取平均值，减少误差。

通过以上步骤，可清晰观察大肠杆菌的生长动态，为后续实验（如基因表达、发酵优化等）提供参考（如选择对数期细胞进行实验）。

北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

大肠杆菌生长曲线的测定之实验原理与操作步骤及数据处理！

举报/Report

我的更多文章

下载客户端阅读体验更佳