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如何控制稀释平板菌落计数实验中的接种量和涂布均匀度?

2026-02-28 15:48阅读:
如何控制稀释平板菌落计数实验中的接种量和涂布均匀度?



百欧博伟生物:通过固定接种体积、规范涂布操作手法、优化实验细节,可精准控制接种量和涂布均匀度,避免菌落重叠或分布不均。

1、接种量的精准控制

选用定量移液管/移液器:优先使用量程匹配的无菌移液管(如 0.1mL、1mL)或可调移液器,提前校准确保体积精准。

统一接种体积:实验中固定接种量(常规为 0.1mL),滴加菌液时待移液管/移液器液滴自然滴落,避免吹吸导致体积偏差。

稀释液状态稳定:稀释后的菌液需轻轻颠倒混匀 3-5 次,确保微生物均匀悬浮,避免局部浓度过高影响接种量代表性。

2、涂布均匀度的操作规范

涂布棒预处理:将无菌涂布棒在酒精灯外焰快速过烧灭菌,待涂布棒冷却至不烫手(可轻触培养基边缘验证),避免高温杀死微生物。

规范涂布手法:菌液滴加后,立即用涂布棒以“同心圆”方式从平板中央向边缘缓慢涂抹,再反向重复 1-2 次。


辅助均匀技巧:涂抹时可轻轻旋转平板,确保菌液均匀覆盖整个培养基表面,最后将平板边缘残留菌液涂散,避免边缘菌落堆积。

控制涂布速度:涂布动作轻柔且匀速,避免用力刮擦培养基表面,同时确保菌液在琼脂凝固前完全铺展。

3、关键辅助细节

培养基状态:倒平板后需静置凝固 24 小时,确保表面干燥无冷凝水,避免菌液扩散不均。

操作环境:在超净工作台内快速完成接种和涂布,减少菌液蒸发或污染风险。

平行样一致性:同一稀释度的多个平板,采用相同的接种和涂布节奏,保证平行样间的一致性。

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